杜仲药材薄层色谱鉴别研究

　　【摘要】目的：以杜仲药材对照品、松脂醇二葡萄糖苷和京尼平苷酸为对照，建立杜仲药材的薄层色谱鉴别。方法：采用硅胶G高效预制板，以三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸（1∶7∶1∶1）为展开剂上行展开。结果：考察不同的提取方法，展开剂和展开条件，最终确定实验方法。经对5批药材进行试验均斑点清晰，分离度好。结论：鉴别方法灵敏度高，专属性强，可用于杜仲药材的定性鉴别。
　　【关键词】杜仲；松脂醇二葡萄糖苷；京尼平苷酸；薄层鉴别
　　【中图分类号】R282.5【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）02-0008-02
　　杜仲药材是被子植物门杜仲科杜仲属植物的树皮[1]，在中国药典2010年版中，杜仲药材的定性鉴别仍为外观性状及显微鉴别，这种鉴别方法对于完整的杜仲药材来说是可行的，但对于粉末状药材或药材提取物等来说就不适应。根据有关报道，杜仲的降压成分主要是松脂醇二葡萄糖苷，属于木质素类化合物，其降压作用明显且未见不良反应，且对动物血压有双向调节功能，也是现行药典定量成分。另外，杜仲药材所含的京尼平苷酸具有一定的防癌、抗癌、抗肿瘤、抗辐射损害、抗氧化、抗衰老及调节血压等作用。本文以杜仲药材对照品、松脂醇二葡萄糖苷和京尼平苷酸为对照，建立了杜仲药材的薄层鉴别方法，具有斑点清晰，分离度良好，操作简便，方法重复性好的特点。
　　1仪器和试药
　　硅胶G高效预制板，索氏提取器，水浴锅（DK-98-11A，天津市泰斯特仪器有限公司）。松脂醇二葡萄糖苷（批号111537-200501）、京尼平甘酸（批号111828-201102）、杜仲（批号121202-0301）均购自贵州省食品药品监督管理局，药材样品经贵州省食品药品检验所中药检测室鉴定为杜仲药材。所用试剂均为分析纯。
　　2方法研究与结果
　　2.1溶液制备方法
　　2.1.1供试品溶液采用《中国药典》2010年版中对杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量测定的提取方法。取杜仲药材2g，精密称定，置索氏提取器中，加入三氯甲烷适量，加热回流6h，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，再置索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流6h，提取液过滤回收甲醇至适量，转移至10ml两瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
　　2.1.2对照药材溶液取杜仲对照药材2g，精密称定，置索氏提取器中，按照供试品溶液的方法制备即得。
　　2.1.3对照品溶液松脂醇二葡萄糖苷溶液的制备：取松脂醇二葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液。京尼平苷酸溶液的制备：取京尼平苷酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液。
　　2.2薄层条件的优化
　　2.2.1展开剂及展开条件的考察和比较通过系列预试验，确定基本具体操作方法：分别吸取对照品溶液，对照药材溶液和供试品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，将展开剂倒于展缸中预饱和30min，薄层板预饱和20min展开后，上行展开，展距8cm.。取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液显色。
　　考察石油醚-乙醚（7：3）；石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4：3：3：1）；石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（5：4：0.5：0.5）三种展开剂，试验结果表明，只有石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（5：4：0.5：0.5）可以将杜仲分离，但是分离效果亦不理想。经进一步对三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液展开系统的有关比例进行调整，分别考察三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（3：5：1：0.5）；三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（1：7：1：1）；三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（1：8：1：1）。结果这三种展开剂都可以再薄层板上将杜仲药材成分进行分离，但是经三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（3：5：1：0.5）展开的松脂醇二葡萄糖苷的Rf值太低，经三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（1：8：1：1）展开的中松脂醇二葡萄糖苷的Rf值太高，只有三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（1：7：1：1）中的松脂醇二葡萄糖苷的Rf值较为恰当，见表1。
　　2.2.2点样方式和点样量的比较考察点状点和条带状点两种方式，结果显示，点条带状点比较容易出现拖尾且斑点分离不明显，点状点斑点比较清晰。在点样量为3μl时，京尼平甘酸溶液和供试品溶液斑点均清晰，并且供试品斑点分离较好，但是对照药材和松脂醇二葡萄糖苷溶液斑点过浅，在紫外灯下几乎观察不到，故把对照药材溶液的点样量增加到4μl，松脂醇二葡萄糖苷溶液的点样量增加到6μl，结果分离效果明显，斑点清晰。故确定京尼平甘酸溶液和供试品溶液点样量为3μl，对照药材溶液的点样量为4μl，松脂醇二葡萄糖苷溶液的点样量为6μl。
　　2.2.3检视条件的选择在日光条件下检视供试品溶液的展开斑点，在与京尼平甘酸对照品对应的位置上可显相同颜色的斑点，但是与松脂醇二葡萄糖苷对照品对应位置上的斑点太浅，不易辨认。在紫外条件下，供试品溶液与京尼平甘酸和松脂醇二葡萄糖苷对照品对应的位置上均可显相同颜色的斑点，且斑点清晰，容易辨认。综合考虑，选择紫外光源作为检视条件。
　　2.2.4层析条件的验证薄层板：硅胶G高效预制板；点样：点状点样，京尼平甘酸溶液和供试品溶液点样量为3μl，对照药材溶液的点样量为4μl，松脂醇二葡萄糖苷溶液的点样量为6μl；展开剂：三氯甲烷-正丁醇-水-乙酸溶液（1：7：1：1）为展开剂。展缸预饱和30min，上行展开8cm，显色：喷以5%香草醛硫酸溶液显色，在100℃加热显色至斑点清晰。检视光源：紫外光。结果如图1、2。
　　3讨论
　　杜仲的薄层鉴别报道中[4-6]，一般只采用松脂醇二葡萄糖苷作为对照，本研究设立了对照品药材、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸三个对照，从而可提高杜仲药材定性鉴别的专属性和可控性。同时，以本研究确定的展开系统鉴别杜仲药材，经多批次样品试验表明方法的重现性良好。对于样品溶液的制备，曾探讨过多种方法，但都不能有效的去除杜仲胶等杂质，最终选择2010年版《中国药典》中对于松脂醇二葡萄糖苷的提取方法。从薄层板的结果可知，供试品分离效果良好，在实际检测中，杜仲药材薄层鉴别的供试品溶液可直接利用其含量测定的提取溶液进行试验。
　　参考文献
　　[1]叶文峰.杜仲叶中化学成分、药理活性及应用研究进展[J].林产化工通讯，2004，38（5）：40-43.
　　[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.
　　[3]胡文彬.杜仲中和松酯醇二葡萄糖苷的分离及多种成分同时检测方法[D].长沙：中南林业科技大学，2012.
　　[4]谭莉莉，万小强，王刚.贵州产杜仲乙醇提取物UV、TLC及HPLC指纹图谱的比较研究[J].遵义医学院学报，2003，26（2）：112-113.
　　[5]郑雪，刘泽纬，丁来欣，等.杜仲叶中松脂醇二葡萄糖苷的提取分离及含量测定[J].食品科学，2012，33（6）：166-170.
　　[6]戚向阳，陈维军，张声华.杜仲中双环氧木脂素二糖苷分离纯化技术的研究[J].林产化学与工业，2005，25（4）：47-50.
　　（收稿日期：2013.12.07）

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