绿豆药材质量标准研究

　　[摘要] 为了对绿豆药材进行有效的质量控制，该研究建立了绿豆药材的质量控制方法与标准。参照《中国药典》2010年版附录相关方法，对绿豆药材的水分、灰分及醇溶性浸出物进行测定；采用薄层色谱法，以硅胶GF254为薄层板，乙酸乙酯-甲醇-水（10∶1.7∶1.3）为展开剂，以牡荆苷和异牡荆苷为对照，建立其薄层鉴别方法；采用HPLC建立主要有效成分牡荆苷和异牡荆苷的含量测定方法：采用Prevail C₁₈ （4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈-水（23∶77）为流动相，流速1.0 mL·min^-1，柱温30 ℃；检测波长337 nm。结果绿豆中各成分在紫外光灯（254 nm）下检视，能得到较好的分离；含量测定方法学研究结果表明，牡荆苷在6.12～98 mg·L^-1，异牡荆苷在6.85～109.6 mg·L^-1线性关系良好，回归方程分别为Y=46.213X-7.100 （r=1.000）和Y=54.515X+6.829（r =1.000）；平均回收率分别为98.2%（RSD 1.9%）和97.2%（RSD 0.79%）。25批绿豆药材样品的测定结果表明，牡荆苷的质量分数为1.076～2.062 mg·g^-1，异牡荆苷的质量分数为1.127～2.303 mg·g^-1，不同产地样品中牡荆苷和异牡荆苷的含量差异不大；醇溶性浸出物的结果为13.27%～18.46%，水分为9.59%～12.43%，总灰分为2.63%～3.53%。上述结果表明建立的标准具有很好的专属性和准确性，可用于绿豆药材的质量控制。
　　[关键词] 绿豆；牡荆苷；异牡荆苷；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法
　　[收稿日期] 2013-08-26
　　[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项（2012ZX09301002-002-002， 2012ZX09304-005）；国家自然科学基金优秀青年基金项目（81222051）；2015年版药典标准提高项目
　　[通信作者] *姜勇，副教授，Tel： （010）82802719， E-mail： yongjiang@bjmu.edu.cn；*屠鹏飞，教授，Tel： （010）82802750， E-mail： pengfeitu@bjmu.edu.cn
　　[作者简介] 李艳荣，讲师，E-mail： liyaong00001@163.com 绿豆又名青小豆，为豆科草本植物绿豆Vigna radiata （Linn.） Wilczek的干燥种子，为常用的药食两用植物，具有清热祛暑、利水消肿、解毒排脓等功效，用于解痈肿疮毒、增强免疫力、降血脂、抗肿瘤、治疗烧伤[1-2]等。现代药理学研究表明绿豆具有抗氧化[3]、抑菌[4]、抗肿瘤[4]、降血脂[5]、降血糖[5]以及解毒等多种药理作用。绿豆药材是《中国药典》2010年版中收载的多个成方制剂，如护肝片、消络痛片、消络痛胶囊和清宁丸的重要组成药味。然而，关于绿豆的质量标准目前只有国标（GB/T 10462-2008），而且是按粮油标准起草，没有对药效成分进行定性、定量检测，难以控制其药材及其成方制剂的质量和临床用药的有效性和安全性。因此，有必要建立绿豆的药用标准，以实现对药材及其成方制剂质量的有效监控。关于绿豆质量分析方面的报道较少，仅有文献[6-8]报道了绿豆中牡荆苷和异牡荆苷的含量测定方法，但色谱峰的分离不理想，而且仅对2～3个批次的样品进行了分析，不具有代表性。本研究首次建立了绿豆药材完善的质量控制方法和标准，包括水分和灰分的检查、醇溶性浸出物的测定及牡荆苷和异牡荆苷的TLC薄层鉴别和含量测定，并对25批不同产地的绿豆药材样品进行了检测，制定了合理的限度，为绿豆药材及其成方制剂的质量控制提供了依据。
　　1 材料
　　Agilent1100高效液相色谱仪：二极管阵列检测器，四元低压梯度泵，真空脱气机，柱温箱，自动进样器；数据处理机：Agilent1100色谱工作站；EYELA SB-2000水浴锅（上海爱朗仪器有限公司）；UV-VI型紫外分析仪（北京智源通技术研究所）；KQ-5000DE型数控超声波清洗器（40 KHz，昆山市超声仪器有限公司）；202-00AB台式电热恒温干燥箱（中国天津泰斯特仪器有限公司）；1/1万电子分析天平（BS 110S，美国Sartorius）；1/10万电子分析天平（BP 211D，美国Sartorius）；马弗炉（美诚，P型陶瓷纤维马弗炉，TM-0612P，北京盈安美诚科学仪器有限公司）。
　　乙腈（色谱纯，天津彪仕奇有限公司），重蒸水（自制）。分析级甲醇、乙酸乙酯、无水乙醇（北京化工厂）；硅胶GF254薄层色谱硅胶预制板（批号20120618，烟台市化学工业研究所）。对照品牡荆苷（批号130326，纯度≥99%）购自上海融禾医药科技有限公司，异牡荆苷（ID：2246/8804，纯度≥98.0%）购自上海博兴科贸有限公司。25批绿豆药材（LD）均为市售品及产地收集（2011年秋季收集），经北京大学药学院屠鹏飞教授鉴定为豆科植物绿豆V. radiata的干燥种子，样品收集信息详见表1。
　　表1 绿豆样品收集信息
　　Table 1 Sample collection information for Vigna radiata
　　2 方法与结果
　　2.1 薄层色谱鉴别
　　2.1.1 供试品溶液的制备 取本品粉末2 g，加入70%甲醇25 mL，浸泡15 min，超声处理30 min，离心10 min（6 000 r·min^-1），15 mL于蒸发皿中，在70 ℃水浴上蒸干，残渣加70%甲醇2 mL使溶解，移至离心管中离心10 min（6 000 r·min^-1），上清液作为供试品溶液。

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