无尘室规范专业资料

　泗阳云禾源无尘室泗阳云禾源无尘室制程制程规范规范

　目

　录

　一、

　组织培养· ·································· ··· ·· ····· ·

　2 2

　二、

　增殖培养· ···································· ·· ····· ·

　3 3

　三、

　· 各级培养基制作····························· ·· ···· ·

　4 4

　四、

　· 人职员作责任分配表··························· ·· ···· · ·

　6 6

　五、

　· 无尘室工作人员调休措施························· ·· ·· ·

　9 9

　六、

　· 无尘室工作人员奖逞措施·························· ··· ·· · 10

　七、

　薪资说明· ·························· ··············· 10

　八、

　· 补充说明········································ 11

　制程和规范

　一、

　组织培养：

　1. 查高产能栽培库菌谱表，分析得以确定无任何遗传性病史，采集5 棵金针菇； 2. 金针菇菇伞均匀圆厚、菇杆挺直、菇身纤维直密、菇脚不干缩； 3. 使用 10#解剖刀将菇帽顶表面切除，使用刀尖取出菇杆和伞肉之间子实体，移入 PDA 培养皿中做菌丝转换培养； 4. 每瓶金针菇组织分离2个细胞培养皿，采集5组共10个组织培养； 5. 放置恒温培养箱中，温控 20℃湿度自然； 6. 培养 12 天后进入各项检测：液态摇瓶培养（纯度分析），目视强度比较，结抗现象交叉比对，显微镜检； 7. 5 天后精选出 2 组织培养细胞培养皿，分别编号为 A 组及 B 组； 8. 将 AB 两组液态培养液，增殖于木屑三角瓶中进行着床试验； 9. 20 天后菌丝熟成在接入栽培瓶培养基中进入出菇试验； 10.26 天后成菇采收时将 AB 两组作产质比对，选出优异表现组别再进行另一次组织培养； 11.整个步骤耗时约 65～70 天；

　菌种名━ 组别

　母 代日期━代数

　移转日期━代数

　菌种名━组别

　母 代日期━代数

　移转日期━级数

　T022 ━A A

　0802 ━1 1

　0811 ━2 2

　T022 ━A A

　0802 ━1 1

　0811 ━2 2

　菌种名━组别

　母 代日期━代数

　移转日期━级数

　T022 ━A A

　0802 ━1 1

　0827 ━3 3

　菌种名━组别

　母 代日期━代数

　移转日期━级数

　T022 ━A A

　0802 ━1 1

　0921 ━4 4

　菌种名━组别

　母 代日期━代数

　移转日期━级数

　T022 ━A A

　0802 ━1 1

　1016 ━5 5

　T022 ━B B

　0802 ━1 1

　0811 ━2 2

　T022 ━B B

　0 0 802 ━1 1

　0811 ━2 2

　T022 ━B B

　0802 ━1 1

　0827 ━3 3

　T022 ━B B

　0802 ━1 1

　0921 ━4 4

　T022 ━B B

　0802 ━1 1

　1016 ━5 5

　PDA

　一

　级

　A/B 各2 2 取1 1

　木屑三角瓶

　二级

　A/B 各3 3 取2 2

　木屑原种

　三级

　A/B 各 22 取 20

　菌种瓶

　四级

　A A 或 或 0 B 40 篮

　栽培瓶

　五级

　6 24576 瓶/ / 库

　二、

　增殖培养：

　1. 将精选 2 组组织培养皿分别移转到细胞培养皿中； 2. 放置恒温培养箱中，温控 20℃湿度自然； 3. 各代种菌谱表编码以下所表示：

　三、

　各级培养基制作：

　1. 一级种 PDA 制作方法：1000cc 水（1 千克）、300g 土豆去皮去芽、25g 葡萄糖、25g 琼脂粉； 制作工序：

　① 细胞培养皿空瓶洗净后，塞入脱脂棉后干热杀菌 120℃四小时，冷却备用； ② 土豆切丁1公分大小煮25分钟，使用1200cc水煮成1000cc；（土豆吸收及水蒸发量为 200g）

　③ 经纱布过滤后取汁，加入葡萄糖 25g、琼脂 25g，煮沸关火。

　④ 注入培养皿中 15 ㏄（厚度约为 3 ㎜），立放灭菌 120 度 25分钟，取出冷却（3 天后使用）； ⑤ 保留环境在恒温培养箱中温度 20℃，使用期限 15 天； ⑥ 接种（增殖培养或组织培养）后，足三天后采取立放方法培养,第五天筛选第一次，第 8 天筛选第二次，将走菌速度过快或过慢淘汰，菌面未形成三圈者淘汰； ⑦ 走菌条件：恒温 20℃,不得放置低温保留； 2. 二级种木屑三角瓶制作方法：纯木屑、米糠、大豆皮、麸皮、水、三角瓶 6 个； 制作工序：

　① 300ml 空瓶洗净后，塞入脱脂棉后干热杀菌 120℃四小时，冷却备用；（或使用透气硅胶栓，可免去空热杀菌）

　② 木屑使用网筛过选，去除细粉及过粗颗粒及杂质； ③ 装填后含瓶重 320g 含水率 63％、，木屑百分比 78％、米糠百分比 15％、大豆皮 2％、麸皮 5％。

　④ 装填后打孔，在使用清水洗净四面，塞棉花后包牛皮纸或使用透气硅胶栓封瓶口； ⑤ 灭菌栽培瓶一同灭菌，完成后放置无尘操作台冷却后接种； ⑥ 接种后放置养菌室进行驯化培养阶段，温控 19℃。

　3. 三级种玻璃原种瓶制作方法：纯木屑、米糠、大豆皮、麸皮、水、玻璃瓶 44 瓶；（A 种为主 B 种备用）

　制作工序：

　① 500ml 空瓶洗净后，塞入脱脂棉后干热杀菌 120℃四小时，冷却备用；（或使用透气硅胶栓，可免去空热杀菌）

　② 木屑使用网筛过选，去除细粉及过粗颗粒及杂质； ③ 装填后含瓶重 630g 含水率 63％、木屑百分比 78％、米糠百分比 15％、大豆皮 2％、麸皮 5％； ④ 装填后打孔，再使用清水洗净四面，塞棉花后包牛皮纸或使用透气硅胶栓封瓶口； ⑤ 灭菌栽培瓶一同灭菌，完成后放置菌种冷却室冷却后接种； ⑥ 接种后放置菌种养菌室进行驯化培养阶段，温控 18℃； 4. 四级种菌种瓶制作方法：纯木屑、米糠、大豆皮、麸皮、水、塑料瓶 640 个／40 篮；（每隔 3 天多做 B 种 40 篮以作备用）

　制作工序：（可和三级种配方一同制作使用）

　① 1100ml 空瓶洗净后倒放备用； ② 木屑使用网筛过选，去除细粉及过粗颗粒及杂质； ③ 装填后含瓶重 830g 含水率 63％、木屑百分比 78％、米糠百分比 15％、大豆皮 2％、麸皮 5％； ④ 装填后打孔加菌种专用盖，再使用清水洗净四面； ⑤ 使用橡皮筋将瓶盖下沿套住； ⑥ 灭菌栽培瓶一同灭菌，完成后放置菌种冷却室冷却后接种； ⑦ 接种后放置菌种养菌室进行培养阶段，瓶间温度 18℃； ⑧ 培养期间注意事项：接种后第 10 天初选一次，如发觉异常时查看菌谱，不良率达 1％时（6 瓶）立即回报处里； ⑨ 培养第 18 天进入双接阶段，查看走菌速度及菌面是否积存水珠，如有异常立即回报；

　四、

　人职员作责任分配表：（接菌班、环控班、菌种班）

　1. 接菌班；（2 人）

　① 08：00 以前完成接菌全部程序，一人将前一日处里好菌种移入接菌室，另一人同时火焰消毒接菌机，08：00 接出第一篮栽培瓶，12：00 前接菌室完成清理工作； ② 接菌期间每台接菌机使用2篮菌种时，根本清理接菌机一次，导槽及压克力板及活动口拆卸后使用 75 度酒精布擦洗，再将挖刀擦拭，组装完成后使用火焰枪过火消毒； ③ 下午 13：00 或餐后 2 人同时依程序进入无尘室进行处里菌种工作； ④ 挑选菌种指标：每次使用量为 40 篮菌种，假如处里时发觉异样或杂菌超出 6 瓶时,立即停止处里,立即会报主管人员，查出问题发生根源再提报厂长进行紧急补救方法。

　⑤ 因菌种以 A 种为关键繁殖种，每日接种数量为 40 篮，联作三天时第四天会加作 B 种 40 篮作为紧急备用； ⑥ 如正常生产无异常时，紧急备用 B 种菌种需移入栽培房做生长之用； ⑦ 处里菌种工作完成，立即清理现场及交付日报表格后下班； ⑧ 所使用菌种是上个循环菌种班时自己所接菌种，一个循环结束后将轮至环控班工作； 制作工序：

　① 菌种养菌室取菌种 40 篮∕批； ② 每瓶开盖泡入甲酚皂（来苏尔）50：1 稀释液中取出，倒盖篮内堆放； ③ 在 FFU 工作台下由一人挖除上层菌皮，交付给另一人使用 75度酒精布擦拭瓶口（不得碰触到菌面）再用酒精灯烧菌面，倒放在杀菌过铁板篮内（铁板使用甲酚皂 50：1 稀释液泼洒，造成水封瓶口）堆放至隔天使用； ④ 将早晨接完铁板篮及下午剩下空篮盖移出至做菌场指定位置存放；

　2. 环控班；（2 人）

　① 早上 07：30 沐浴、08：00 以前依程序进入无尘室进行工作； ② 将已洗好无尘服取出至晾衣区挂起； ③ 量测预冷室中待接菌瓶中温度是否达成 18℃，如达成标准立即通知接菌班人员进行常规工作； ④ 量测菌种预冷室中待接菌瓶中温度是否达成 18℃，如达成标准立即通知菌种班人员进行常规工作； ⑤ 量测菌母养菌室、原种养菌室、试验室、菌母处里室温度是否正常，填表交付主管人员； ⑥ 统计每个压差计值，填表交付主管人员； ⑦ 使用风速计量测每一个FFU进风口风量，填表交付主管人员； ⑧ 使用圆形培养皿进行一楼各车间空间落尘测试 30 秒，每间对角各测一点，编号后交付主管进行培养； ⑨ 使用二氧化氯、必洁仕、75 度酒精布三种药剂轮番使用，每个轮组交接前必需擦拭无尘区每个房间墙、天、地板一次； ⑩ 擦拭时不得和一楼工作相冲突，接菌期间不得在正上方区域走动或清洁，菌种处里时不得在正上方区域走动或清洁； ? 每日工作除必需量测、统计、无尘服晾干收纳等工作项目外，在轮班前自行调整清洁区域和下班时间； ? 一个循环结束后将轮至菌种班工作； 3. 菌种班；（2 人）

　① 早上 07：30 沐浴、08：00 以前依程序进入无尘室进行工作； ② 依据二级、三级、四级次序进行接种工作； ③ 二级、三级、四级接种时在无尘操作台进行； ④ 将各级种分类依序放置定位，并编号统计于菌谱表； ⑤ 负责各级种自己所接种初检及复检工作，并交付表格随时反应很态现象；

　⑥ 接种完成自行清理工作区域，每日工作完成后下班； ⑦ 一个循环结束后将轮至接菌班工作； 4. 搬菌班；（2 人）

　① 08：00 以前依程序进入无尘室进行工作； ② 将前一天换洗无尘服移入洗衣机清洗； ③ 取样量测四个角落台车瓶内温度是否达标温度 18℃； ④ 如温度达标时关闭下层冷风机； ⑤ 接种工作完成后一次性移出台车，经第四炉转出； ⑥ 清理预冷室及缓冲区，开紫外线灯并消毒后下班； ⑦ 下午出炉时以进炉次序依序推出，摆放方法依据依据做菌时第一台车至最终一台车依要求位置摆放，接菌时迭放传送带次序也依据摆放次序依序接菌； ⑧ 出炉注意事项：

　第一炉结束后达开门条件时，首先全开内门,再开启外门 30 公分，当第二炉结束后达开门条件时，首先全开内门,再开启外门 30 公分，此时推出第一炉台车至预冷室依要求位置摆放，出完炉后关闭内门； 当第三炉结束后达开门条件时，首先全开内门,再开启外门 30 公分，此时推出第二炉台车至预冷室依要求位置摆放，出完炉后关闭内门； 当第四炉结束后达开门条件时，首先全开内门,再开启外门 30 公分，此时推出第三炉台车至预冷室依要求位置摆放，出完炉后关闭内门； 当第四炉炉内温度稍降时，推出第四炉台车至预冷室依要求位置摆放，出完炉后关闭内门； ⑨ 出炉完成后使用地拖沾二氧化氯稀释液，将预冷室及缓冲室地板脱湿，使用甲酚皂 50：1 稀释液消毒； ⑩ 菌种预冷程序和栽培瓶出炉及消毒程序相同；

　? 搬运、清洁、消毒等工作完成时开启预冷室、缓冲室、菌种预冷室紫外线灯，以后下班离开； ? 打开炉门前必需注意缓冲室压差计是否正压值达标； 5. 预备班；（2 人）

　① 负责二级种、三级种装瓶工作、四级种加工工作； ② 天气炎热时（做菌场内温度达 25℃以上）二级种、三级种、四级种装填完成后立即搬入 20 度以下库房中保留，等候第一炉门关闭前放入灭菌； ③ 在要求存放位置取菌种专用铁板篮进行清洗，放置灭菌炉杀菌备用； ④ 由栽培空瓶中挑选透明度高、无破损、瓶口完整空瓶提前清洗菌种瓶倒盖以作隔日使用； ⑤ 挑选菌种专用瓶盖，无变形、无损坏、内置透气无纺布洁净无菌丝或杂物； ⑥ 依据无尘室主管提出数量：制作 PDA 细胞培养皿及圆形培养皿，供无尘室使用； ⑦ 二级种瓶、三级种瓶塞棉花并干热杀菌备用 五、

　无尘室工作人员调休措施：（接菌班、环控班、菌种班）

　① 无尘室内部工作属责任制，在接菌班及菌种班操作人员不可避免请假要求时，无尘室主管由环控组调动，在调动期间接菌班及菌种班应在要求时间内工作完成后，齐力完成环控班当日计划工作； ② 调休时无尘室主管必需统计每人工作调度情况，用以追踪菌谱可能发生变量； ③ 当无法调度时再由预备班以不影响关键制瓶工作前提下，进行调度； ④ 预备班如有休假时，由无尘室主管递补工作； ⑤ 搬菌班如有休假时，由无尘室主管向厂长提报申请外援； ⑥ 无尘室人员在本职员作完成后必需支持其它部门调度工作；

　六、

　无尘室工作人员奖惩措施：

　① 无尘室内部工作属责任制，接菌班、环控班、菌种班、搬菌班，以追踪经手一个周期 3～5 级菌良率为计算标准； ② 栽培瓶五级菌良率达 99％时，该班各得岗位奖金 500 元； ③ 栽培瓶五级菌良率达 98％时，该班各得岗位奖金 300 元； ④ 栽培瓶五级菌良率达 97％时，该班各得岗位奖金 200 元； ⑤ 栽培瓶五级菌良率达 96％时，该班取消岗位奖金； ⑥ 栽培瓶五级菌良率达 95％时，该班扣除岗位奖金 200 元； ⑦ 栽培瓶五级菌良率达 94％时，该班扣除岗位奖金 300 元； ⑧ 栽培瓶五级菌良率达 93％时，该班扣除岗位奖金 500 元； ⑨ 栽培瓶五级菌良率达 92％时，该班调离无菌室部门； ⑩ 私自省略工序、造假填表或更改工作规范者，该班调离无菌室部门其它各班取消全部津贴； ? 无尘车间主管（组长）在合理标准下含有对各班班员任命及调职权力； ? 无尘车间主管（组长）奖、惩和各班每七天期相同金额处里； ? 为了监控及保护菌成功率，无尘车间主管有权监督养菌车间前置区环境维护，必需时可和养菌车间主管研究改善，经厂长认可实施； 七、

　薪资说明：

　① 维持基础薪资； ② 支持其它部门工作时加班费； ③ 当经过技能评测达标时，熟悉操作接菌机时加发 100 元； ④ 当经过技能评测达标时，熟悉菌种优劣判定时加发 100 元； ⑤ 依据岗位奖金奖惩发放标准； ⑥ 良率不达各级标按时，扣除岗位奖金方法，企业只保留基础薪资外由其它工资收入中扣除（含部门外加班费）；

　八、 补充说明：

　① 连续 2 个周期总评量结果良率达 98％时，企业将实施第二阶段调整良率并提升岗位奖金做为奖励； ② 岗位奖金认定方法，由厂长依据专业判定决定问题根源，如发生在操作人员渎职所造成不良率提升，无任何理由接收罚款处份； ③ 工序更改或省略不管良率高或低，企业将以渎职理由论处，立即调离无菌室部门，并扣除全部基础薪资以外其它工资收入； ④ 无尘车间主管（组长）奖、惩和各班每七天期相同金额处里，如督导不周造成企业重大损失时，企业将以渎职理由论处，立即调离无菌室部门，并扣除全部基础薪资以外其它工资收入； ⑤ 一级种和无菌室环境设定由厂长负责或授权她人代理，其它工作由组长负责监督及实施； ⑥ 以下空格由手写制订：

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