用一测多评的方法测量茶叶的有效成分的实验设计

　　【摘要】本实验采用hplc的方法，来测量不同茶叶的有效成分，大多实验证明一测多评的方法是比较方便，快速，成功的验证，测量了茶叶中的有效成分。
　　【关键词】一侧多评；茶叶
　　1.方法原理
　　在一定的范围内（线性范围内）成分的量（质量或浓度）与检测器响应成正比，即：W=f*A。在多指标质量评价时，以茶叶中儿茶素为内标，建立该组分与其他组分之间的相对校正因子，通过校正因子计算其他组分的含量。这种测定一个成分，实现对多个成分定量的方法命名为一测多评法。
　　假设某样品中含有i个组分Wi/Ai=Fi（i=1，2，…，k，…，m）①式中Ai；为组分峰面积；Wi为组分浓度。选取其中一组分（表儿茶素EC）k为内标，建立组分k与其他组分（GC，EGC，GCG，ECG）m之间的相对校正因子Fkm=Fk/Fm=Wk*Am/Wm*Ak ②Wm=Wk*Am/Fkm*Ak ③式中Ak为内标物峰面积，Wk为内标物浓度。Am为其他组分m峰面积；Wm为其他组分m浓度。
　　2. 实验材料
　　2.11仪器
　　高效液相色谱仪，分析色谱柱，分析天平，电热恒温水浴，自动双重纯水蒸馏器，三角瓶，医用注射器，0.2u m水系微孔滤膜。
　　2.12试剂
　　2.2
　　儿茶素类化合物标样：表儿茶素（EC）、没食子儿茶素（GC）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）。
　　高纯水：18.2兆欧/cm；甲醇：色谱纯，冰醋酸：分析纯。
　　2.3茶叶
　　云雾绿茶，普洱茶，碧螺春绿茶（已有，且已打好粉）
　　3.实验方法
　　色谱条件为：
　　检测波长：278nm
　　流动相A为O.1%的乙酸溶液，流动相B为甲醇。
　　检测器：紫外检测器，二极管阵列检测器
　　流动相洗脱梯度：流动相A：0.1%乙酸水溶液，流动相B：甲醇。
　　流动相梯度：从0到15 min，流动相B即有机相甲醇，从10%到60%；从15到20 min，流动相B保持在60%；从20到20.5 min，流动相B从60%回到10%；从20.5到25 min，整个分析周期结束，流动相B保持在10%。柱温30℃；紫外检测器检测波长278 nm，检测器扫描范围200—350 nm；分析周期25 min，进样量10ul。
　　混合标样的配制标准储备液：分别称取5种儿茶素类化合物的固体标样各10 mg，用50%的甲醇水溶液溶解并定容至10 mL。则以上5种儿茶素类化合物的标准储备液浓度均为1 mg/mL。混合标准溶液：各取5种儿茶素类化合物的单标储备液1 mL，混合并用50%的甲醇水溶液定容至10 mL，则混合标准溶液的浓度为100ug/mL
　　标准工作曲线混合溶液：先取100ug/mL的混合标准溶液5 mL，用50%的甲醇水溶液定容至10mL，得到50ug/mL的混合标准溶液；再取100ug/mL的混合标准溶液I mL，用50%的甲醇水溶液定容至10 mL，得到10ug/mL的混合标准溶液；再分别取0.5和2.5 mL的50ug/mL的混合标准溶液，用50%的甲醇水溶液定容至25 mL，分别得到1和5ug/mL的混合标准溶液。最终得到的标准工作曲线混合溶液的浓度分别为1、5、10、50、100ug/mL。
　　样品处理过程：将样品茶叶先进行粉碎，过40目的筛子，再准确称量1.Og茶样品放人三角瓶中，加入120 mL的纯水，在70℃的水浴中浸提50 min，然后将上清液过O.2um水系微孔滤膜，装入进样瓶中，即可用于分析。
　　4.方法学考察内容及数据记录
　　记录
　　茶素标样，三种茶叶样品的保留时间.
　　收集
　　1.色谱图
　　（包括：标样色谱图，样品色谱图）
　　2.茶素各组分的标准曲线方程和相关系数
　　3. 校正因子计算
　　（通标准曲线，可以求出表儿茶素（EC）、没食子儿茶素（GC）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）的Wm，因此可以求出校正因子。）
　　4.儿茶素类化合物定量的结果
　　5.精密度实验数据
　　6.重复性实验数据
　　7.回收性实验数据
　　讨论与分析
　　邓永亮在一种快速检测茶叶中儿茶素的HPLC方法中写道，本方法能够同时对9种儿茶素类化合物组分进行分析检测，并使得各组分之间的分离度良好，同时整个分析周期只有25 min，因此是一种快速、高效、准确的分析方法。本方法采用外标法对儿茶素类化合物各组分进行定量，所得到的各组分的标准曲线方程线性良好，说明本方法的准确性令人满意[1]。王智民在“一测 多评"法中药质量评价模式方法学研究中写道，用夹角余弦法对一测多评法的计算值与外标法实测值进行比较，评价一测多评法的准确性和科学性。结果：建立了一测多评法方法学的考察模式；方法准确性评价结果表明一测多评法的计算值与外标法实测值之间没有显著性差异，实验所得的校正因子[2]。
　　综上所述一侧多评的的方法是操作简单，所使用的试剂、仪器均为较常使用的，这就大大降低了前处理过程的劳动强度，降低了实验成本。
　　【参考文献】
　　[1]邓永亮，冯 雷，吕才有；一种快速检测茶叶中儿茶素的HPLC方法；西南农业学报；2011，24
　　[2]王智民，高慧敏，付雪涛，王维皓；“一测 多评"法中药质量评价模式方法学研究；中国中药杂志；2006.3

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