测定茶叶中游离氨基酸总量研究

　　采用茚三酮比色法测定茶叶中游离氨基酸总量。确定采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸标准溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸盐缓冲液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用数显电热恒温水浴锅沸水浴15min加热，冷却后蒸馏水定容至25ml，在570nm处测定吸光度。所得线性方程A=4.312X-0.017，相关系数r=0.99955，回收率达到92.2%左右，精确度为0.8%，试验操作简单，重复性和稳定性良好。
　　茶叶 游离氨基酸 茚三酮比色法茶叶中游离氨基酸含量是用来描述茶叶鲜爽程度的一个重要品质指标，还是人体所必需的营养物质，同事对人体疾病的康复和预防起着极重要的保健作用。测定茶叶中游离氨基酸含量对茶叶的开发利用具有一定的指导意义。以谷氨酸为标准品，采用分光光度计为测定仪器，探索一种适合于茶叶游离氨基酸含量的分析方法。本试验对该方法的主要影响因素，精密度和回收率等进行研究，确定了茶叶中游离氨基酸总量的测定方法。
　　1材料与方法1.1仪器和用具数显电热恒温水浴锅，型号电子分析天平：感量为0.0001g，型号紫外可见分光光度计。可调式电炉。1.2试剂和溶液所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。PH8.0磷酸盐缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液95ml和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。2%茚三酮溶液：称取水合茚三酮（纯度不低于99%）2g，加50ml水和80mg氯化亚锡搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。1.3试验方法1.3.1标准贮备液及标准溶液的配制准确称取100mg谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100ml水，定容作为母液。（1ml含谷氨酸1mg）。配制成0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml，0.5mg/ml浓度的标准溶液。采用GB/T8314-2002中茶游离氨基酸的测定方法进行测定。1.3.2样品处理称取3g（精确到0.0001g）粉碎混合均匀过60目筛样品于500ml的锥形瓶中，加450ml煮沸的蒸馏水，沸水浴浸提45min，每10min震摇一次，减压过滤至500ml容量瓶中，残渣用热蒸馏水洗涤2-3次，冷却，定容。
　　2结果与讨论2.1反应条件加水与不加水的比较本试验选择反应条件加水和不加水两种标准系列的比较：分别吸取两组0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mL浓度0.1mg/ml谷氨酸工作液于一组25mL容量瓶中，一组加水4ml，另一组水4ml再分别加入0.5ml的PH8.0的磷酸盐缓冲液+0.5ml2%茚三酮溶液，沸水浴15min加热，冷却蒸馏水定容至25ml，在570nm处测定吸光度。试验结果显示加水的标准系列显色效果不理想，标准曲线线性很差。而不加水的标准曲线线性好，相关系数R2=0.9991。
　　2.2标准工作液浓度的选择本试验通过对配制的不同浓度的标准溶液（0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.3mg/ml，0.4mg/ml）测定加标回收率进行比较。本实验分别选取4份茶粉一份作为本底，另3份加入不同量的氨基酸标准液进行样品处理。取1ml的茶汤测定其游离氨基酸总量作为本底量，另3份分别内含1mg、2mg、3mg的茶氨酸的加标量。按GB/T8314-2002方法测定，试验结果表明0.1mg/ml和0.2mg/ml浓度的标准溶液的回收率比较高，但是考虑到有的样品吸光度高超出标准曲线，所以选取0.2mg/ml浓度的标准溶液最合适。而0.3mg/ml、0.4mg/ml浓度绘制的标准曲线的相关系数逐渐降低，高浓度的比色效果不好，导致回收率低。
　　2.3加热方式的选择本试验选择两种加热方式：数显电热恒温水浴锅、可调节式电炉。本实验选取4份茶粉一份作为本底，另3份加入不同量的氨基酸标准液进行样品处理。取1ml的茶汤测定其游离氨基酸总量作为本底量，另3份分别内含1mg、2mg、3mg的茶氨酸的加标量。按GB/T8314-2002方法测定分别在数显
　　电热恒温水浴锅和可调式电炉加热的沸水浴中加热15min来比较回收率。结果见表2，可以看出数显电热恒温水浴锅加热的平均回收率最高达到92.8%。而可调式电炉加热法回收率为81.9%。且在试验中发现可调式电炉沸水浴加热放置不便易造成受热不均的情况影响，导致还原茚三酮与氨及另一分子茚三酮的缩合反应不完全。2.4测定方法的精确度分别以同一加标的样品重复比色测定5次，计算游离氨基酸总量，结果见表3。RSD为0.80%，平均回收率为92.2%，表明本方法的准确度和精密度良好。
　　3结论采用茚三酮比色法测定茶叶中的游离氨基酸总量，采用沸水萃取，以0.2mg/ml的谷氨酸标准溶液在吸取系列工作液后不加水，加入0.5ml的PH8.0的磷酸盐缓冲液和0.5ml2%茚三酮溶液，采用数显电热恒温水浴锅沸水浴15min加热，冷却后蒸馏水定容至25ml，在570nm处测定吸光度。方法的变异系数小于0.80%，加标平均回收率为92.2%，本方法操作简单，稳定性和重现性较好。
　　参考文献：
　　[1]夏静，罗守进。茶叶游离氨基酸含量测定中的提取方法
　　[J].茶叶科学，1997，17（3）：231-234.
　　[2]中华人民共和国卫生部.茶咖啡碱的测定（GB/T8132—2002）.144-148.
　　[3]中华人民共和国卫生部.茶游离氨基酸总量测定（GB/T8134—2002）.152-154.

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