断面红棕色及类白色土茯苓药材中总鞣质的含量分析

　　[摘要] 土茯苓在药材断面有类白色及淡红棕色2种。在前期的实验发现，2种断面颜色的土茯苓在抗炎效果和化学成分方面有较大差异。该文首次以紫外-可见分光光度法对28个不同采集地断面红棕色及类白色土茯苓中的总鞣质含量进行比较分析，旨在为该药材资源的合理开发利用及质量控制提供一定的实验及理论依据。在实验中对2010年版《中国药典》鞣质含量测定方法中加样回收进行了改进，以鞣酸代替没食子酸进行加样回收试验。
　　[关键词] 断面红棕色及类白色土茯苓；总鞣质；加样回收；鞣酸；紫外-分光光度法
　　土茯苓为百合科植物光叶菝葜Smilax glabra的干燥根茎。具除湿，解毒，通利关节之功能[1]。历版《中国药典》均记载土茯苓在药材断面有类白色及淡红棕色2种，本课题组长期调查的结果表明，全国药材市场上根据其产地不同，将断面红色或白色分为2类来分别使用，如四川、广东、广西、浙江产者为断面类白色，贵州、湖南产者为断面红棕色，从而使该药材在应用上多样化、复杂化。在前期的实验中作者发现，土茯苓有较好的抗炎作用，2种断面颜色的土茯苓在化学成分方面也存在较大差异。而鞣质是植物界中普遍存在的一类次生代谢产物，具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤的作用，近年来越来越多的研究表明鞣质具有清除生物体内过剩的自由基，维护细胞膜的流动和蛋白质的构象，从而在抑制脂质过氧化及心血管病、抗肿瘤、抗突变、抗衰老、抗白内障等方面有独到功效[2]。故鞣质是天然的抗氧化剂，在土茯苓中有收敛、止血、抗炎及抗菌的作用。而有关断面红棕色及类白色土茯苓药材鞣质的含量未见报道，故本文首次对28个不同采集地断面红棕色及类白色土茯苓中的总鞣质含量进行比较分析，旨在为该药材资源的合理开发利用及质量控制提供一定的实验及理论依据。
　　1材料
　　紫外-可见分光光度计（GBC-20，澳大利亚照生公司）、超声提取仪（SK8210LHC，上海科导超声仪器有限公司）、1/1万分析天平（AB104-N，梅特勒上海有限公司）、没食子酸对照品（批号110831-200302，中国食品药品检定研究院）、鞣酸、无水碳酸钠、钨酸钠、钼酸钠、盐酸、磷酸、硫酸锂、溴、干酪素等均为分析纯，蒸馏水为实验室自制。磷钼钨酸试液按2010年版《中国药典》附录中的方法配制。
　　所有采集样品、购买饮片均由贵阳中医学院生药教研室董立莎教授鉴定为百合科植物光叶菝葜S. glabra的根茎，凭证标本保存于贵阳中医学院药学院生药教研室。样品均采用自然阴干的方法干燥。
　　2方法与结果
　　2.1对照品溶液的配制
　　精密称取没食子酸对照品45.68 mg于100 mL棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取10 mL，置100 mL棕色量瓶中，用水稀释置刻度，摇匀，即得（每1 mL中含没食子酸0.045 68 mg）。
　　2.2供试品溶液的配制
　　精密平行称取土茯苓药材粉末1.5 g，各3份，分别置250 mL棕色量瓶中，加150 mL 60%乙醇，放置过夜，超声处理20 min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置（使固体物沉淀），滤过，弃去初滤液50 mL，精密量取续滤液20 mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。
　　2.3标准曲线的制备
　　精密量取没食子酸对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，5.0 mL分别置25 mL棕色量瓶中，各加入磷钼酸试液1 mL，再分别加水11.5，11，10，9，7 mL，用29%碳酸钠溶液稀释置刻度，摇匀，放置30 min以相应的试剂为空白对照，在760 nm波长处测定吸收度，以吸光度为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标，绘制坐标曲线。得回归方程Y=0.008 4X-0.000 3，r=0.999 0。结果表明没食子酸在0.914～7.309 mg·L^-1成良好的线性关系。
　　2.4测定用溶液的配制
　　2.4.1土茯苓（断面红棕色）总酚测定用溶液的配制 精密量取2.2项下制备的溶液10 mL，置25 mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取所配溶液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，按2.3项下的方法，自“加入磷钼酸试液1 mL”起，加水10 mL即得。
　　2.4.2土茯苓（断面类白色）总酚测定用溶液的配制 精密量取2.2项下制备的溶液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，按2.3项下的方法，自“加入磷钼酸试液1 mL”起，加水10 mL即得。
　　2.4.3不被吸附的多酚测定溶液的配制 精密量取供试品溶液25 mL加至已盛有0.8 g干酪素的100 mL具塞锥形瓶中，密塞，置30 ℃水浴中保温1 h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，加入磷钼酸试液1 mL，加水10 mL即得。
　　2.5测定条件的选择
　　2.5.1检测波长的选择 取没食子酸对照品和总酚比色液，按照2.3项下方法显色，分别在600～900， 400～900 nm进行全波长扫描，得出最大吸收波长为760 nm，与2010年版《中国药典》记载一致。
　　2.5.2干酪素用量的选择 为了评价干酪素吸附鞣质的效率，对干酪素的用量进行了考察。分别精密量取5份都匀杨梅山样品溶液各25 mL于分别装有0.4，0.5，0.6，0.7，0.8 g干酪素的100 mL锥形瓶中，分别密塞，置30 ℃水浴中保温1 h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，按2.3项下的方法，自“加入磷钼酸试液1 mL”起，加水10 mL，即得。结果表明随着干酪素用量的增加游离多酚的含量逐渐减少，当达到0.8 g时，溶液中游离多酚的含量不再减少，说明鞣质已经被干酪素吸附完全，因此确定干酪素用量为0.8 g。

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