HPLC法测定不同产地西洋参中人参皂苷Rb1、Re、Rg1的含量

　　摘要：目的 采用高效液相色谱法测定不同产地西洋参中人参皂苷Rb1、Re 、Rg1的含量，对比云南丽江西洋参与其他产地西洋参中人参皂苷Rb1、Re 、Rg1的含量差异。方法 C18柱为色谱柱，流动相采用乙腈-0.1%磷酸溶液为缓冲液，梯度洗脱，流速为1.1mL/min，检测波长为203nm，柱温为40℃。精密吸取溶液各10μL注入高效液相色谱仪中测定。 结果 人参皂苷Rb1、Re、Rg1在测定范围内有良好的线性关系，它的平均回收率分别为99.70、101.19、100.27%，RSD分别为2.3、2.1、1.7%。结论 该方法准确可靠、便于操作且重现性好，应用性强。不同产地西洋参的化学成分大致相同，但各含量间却存在显著差异，其中吉林靖宇和云南丽江的三种单体皂苷总含量相对较高。
　　关键词：HPLC 西洋参 人参皂苷Rb1、Re 、Rg1
　　中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）02-0073-02
　　西洋参P.quinquefolium L.是多年生宿根名贵药材，具有补气养阴、清热生津的功效，原产于北美洲东部的阔叶林带，具有与中国人参较相似的生态环境，在生产过程中忌地性极强。上世纪50年代末，云南省丽江鲁甸乡引种东北人参成功，被植物学家称之为“北参南移”的创举，1984年又成功种植了西洋参[1]。目前，这里已经成为全中国黄河以南唯一、也是最大的人参、西洋参种植基地[2]。
　　本文采用高效液相色谱法对不同产地西洋参进行含量测定，对比西洋参含量差异，以期对引种30年后的云南丽江西洋参资源进行质量评价，为丽江西洋参资源的利用和开发提供理论基础。
　　1 仪器与材料
　　戴安UltiMate3000高效液相色谱仪，精密电子天平BSA223S-CW（北京塞多利斯科学仪器有限公司），CQ250超声波清洗器0030（上海超声波仪器厂）。
　　人参皂苷 Rg1对照品、人参皂苷 Re对照品、人参皂苷Rb1对照品均购于中国药品生物制品检定所，乙腈为色谱纯试剂，水为超纯水，其他试剂均为分析纯，丽江西洋参药材采自丽江市玉龙县鲁甸乡某参场，其它西洋参药材为各产地市售。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件 色谱柱：Gemini 5u C18 110A，4.6×250mm；Phernomex C18保护柱，乙腈（A）和0.1%磷酸（B）为流动相，进行梯度洗脱，（0～25min，19%～20%A；25～60min，20%～32%A；60～90min，32%～50%A；90～105 min，50%～19%A），柱温40℃，流速1.1mL/min，置于203nm波长处检测。理论板数按人参皂苷 Rb1 计算应不低于 5 000。对照品和西洋参样品图谱见图1、图2。
　　2.2 对照品溶液的制备[3] 取人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1，对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg1 0.1mg，人参皂苷Re 0.4mg，人参皂苷Rb1 1mg的溶液，即得。
　　2.3 供试品溶液的制备 取西洋参粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇溶液50mL，称定重量，置水浴中加热回流提取90 min，放冷，再称定重量，用水饱和的正丁醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，转移至10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
　　2.4 线性关系考察[4] 精密吸取“2.2”项下的混合对照品溶液各 8、10、12、14、16μL进样，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，以各对照品的进樣量（μL）为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程分别为人参皂苷Rg1 Y=0.5165x-0.0249（R=0.9999）；人参皂苷Re Y=4.1656x+8.2318（R=1.000）；人参皂苷Rb1 Y=3.6627x-0.2893（R=1.000）。结果表明，人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1分别在0.08～0.16μg、0.32～0.64μg、0.8～1.6μg范围内呈良好线性关系。
　　2.5 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别于0、2、4、6、8、10、12、24进样，测定峰面积，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1峰面积的RSD值分别为0.15，0.20，0.42%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
　　2.6 精密度试验 分别精密吸取混合对照品溶液10μL，在“2.1”项色谱条件下重复进样6 次，测定峰面积，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1峰面积的RSD值分别为0.23，0.18，0.30%，表明仪器精密度良好。
　　2.7 重复性实验 取制备好的供试品溶液适量，平均分成6份，分别进样，测定峰面积，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1峰面积的RSD值分别为1.92，0.51，0.72%，表明该方法的重复性良好。
　　2.8 加样回收实验 取已知含量的西洋参药材样品约0.5g，平行6份，精密称定，分别加入对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样10μL，按“2.1”项下色谱条件进行测定，计算人参皂苷 Rg1、Re、Rb1的平均加样回收率分别为99.70、101.19、100.27%，RSD分别为2.3、2.1、1.7%。
　　2.9 含量测定 取制备好的供试品溶液适量，按照“2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表1。
　　3 结论
　　本文采用HPLC法对6个不同产地西洋参的主要有效成分人参皂甙Rg1、Re、Rb1进行含量测定，依据2015版《中国药典》[3]要求，西洋参中含人参皂苷 Rg1、Re和 Rb1 的总量不得少于2.0%，结果显示，6个产地样品均符合《中国药典》规定，不同产地西洋参的化学成分大致相同，但含量却存在显著差异，其中美国西洋参的Rg1含量最高，加拿大西洋参的Re含量最高，吉林靖宇西洋参的Rb1含量最高，吉林靖宇和云南丽江的三种单体皂苷总含量相对较高。由以上数据可知，云南丽江种植的西洋参质量极好，引种30年后西洋参质量并没有发生质的变化[5]，为了更好的保护和利用西洋参资源，云南丽江有必要开展西洋参的育种工作，相关研究结果将为云南丽江西洋参的开发利用提供一定的参考数据。
　　参考文献：
　　[1]陈宗莲.西洋参在云南引种初报[J].云南植物研究，1984，（3）：35.
　　[2]华模，李秀春.云药之乡展风采[N].云南日报，2011，01（26）：11.
　　[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2015：131-132.
　　[4]张丹，吴兰芳，王乾，等.不同产地西洋参药材中8种皂苷类成分含量测定及指纹图谱研究[J].中药材杂志，2016，39（10）：2307-2310.
　　[5]魏晓雨，陈增松，田义新，等.不同产地西洋参总皂苷及单体皂苷Rb1、Re、Rg1的含量测定[J].人参研究，2016，（5）：40.

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