HPLC同时测定黑老虎药材中2种三萜酸的含量

　　[摘要] 目的 建立黑老虎中12-乙酰氧基黑老虎酸和开环新五味子酸A的含量测定方法。 方法 采用超声法提取药材，色谱柱为Atlantis T3-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液（80∶20），检测波长：210 nm，流速1.0 mL/min，柱温为30℃。 结果 12-乙酰氧基黑老虎酸进样量在0.0157～0.3140 μg与峰面积值呈现良好的线性关系（r = 0.9998），平均回收率为100.4%，相对标准差（RSD）为2.58%（n = 6）；开环新五味子酸A进样量在0.0848～1.6960 μg与峰面积值呈现良好的线性关系（r = 0.9999），平均回收率为101.1%，RSD为1.21%（n = 6）。 结论 该方法准确、简便、重复性好，可用于黑老虎药材中12-乙酰氧基黑老虎酸和开环新五味子酸A的含量测定。
　　[关键词] 黑老虎；12-乙酰氧基黑老虎酸；开环新南五味子酸A；高效液相色谱
　　[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）08（a）-0031-04
　　[Abstract] Objective To establish a method for the determination of 12-acetoxycoccinic acid and seco-neokadsuranic acid A in root of Kadsura coccinea. Methods Ultrasonic method was used to extract the herbs. HPLC chromatographic conditions included the Atlantis T3-C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm） column， using acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution （80∶20） as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 310 nm and the column temperature was maintained at 30℃. Results The calibration curve of 12-acetoxycoccinic acid was in good linearity over the range of 0.0157-0.3140 μg （r = 0.9998）. The average recovery was 100.4% with RSD of 2.58% （n = 6）. And the calibration curve of seco-neokadsuranic acid A was in good linearity over the range of 0.0848-1.6960 μg （r = 0.9999）. The average recovery was 101.1% with RSD of 1.21% （n = 6）. Conclusion The method is accurate， simple， reproducible， and can be used to determine the content of 12-acetoxycoccinic acid and seco-neokadsuranic acid A in the root of Kadsura coccinea.
　　[Key words] Kadsura coccinea； 12-acetoxycoccinic acid； Seco-neokadsuranic acid A； High performance liquid chromatography
　　黑老虎為五味子科南五味子属植物厚叶五味子Kadsura coccinea（Lem.）A.C. Smith的干燥根，别名冷饭团、布福娜、绯红南五味子、过山龙藤、钻地风等，主要分布于我国广东、广西、福建等岭南地区，以及越南、缅甸等东南亚国家[1]。味辛、性温，具有行气活血、祛风止痛的功效，主要用于治疗风湿痹痛、痛经、脘腹疼痛、跌打损伤等；常用于胃、十二指肠溃疡、慢性胃炎、急性胃肠炎、风湿性关节炎等病[2]，为名优中成药“舒筋健腰丸”“壮腰健肾丸”等产品的主要原料药之一。现代研究表明，黑老虎主要含有木脂素和三萜类化合物，它们具有抗肝炎、抗HIV病毒、抗肿瘤、抗氧化、血小板活化因子拮抗作用及对血管平滑肌的舒张作用等药理活性[3-5]。
　　目前，《广东省中药材标准》等地方标准对黑老虎的质量控制项中，仅有性状鉴别、显微鉴别及薄层鉴别，无“含量测定”项[2]。近年来，国内外许多学者对黑老虎的研究主要集中于繁殖、栽培、化学成分及药理作用等方面，其中，有效活性成分一直都是研究的重点[6-18]。文献调研可知，木脂素类和三萜类是黑老虎的主要生物活性成分，其中三萜酸类成分“12-乙酰氧基黑老虎酸”具有显著的抗HCV活性，可用于制备抗丙肝病毒的药物[19]；“开环新五味子酸A”也具有一定的抗癌活性[20]，而关于黑老虎中三萜酸类成分定量分析的文献尚未见报道。本研究首次建立了高效液相色谱法（HPLC）同时测定不同产地黑老虎中两种三萜酸（12-乙酰氧基黑老虎酸、开环新五味子酸A）的含量，以期为黑老虎药材的资源合理开发及品质评价提供科学依据。
　　1 仪器与试药
　　1.1 仪器
　　Agilent 1200高效液相色谱议（美国安捷伦公司）；Atlantis T3-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，美国安捷伦公司）；Agilent DAD检测器（美国安捷伦公司）；Millpore simplicity-67120型超纯水器（美国密理博公司）；BS110S型万分之一电子分析天平（德国赛多利斯公司）；WXJ型粉碎机（上海凯旋中药机械制造有限公司）；KQ-100DV超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

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