超高效液相色谱?串联质谱法同时测定茶叶中11种植物生长调节剂及吡虫啉、啶虫脒的残留

　　摘要建立了超高效液相色谱串联质谱法同时快速测定茶叶中11种植物生长调节剂（PGRs）及吡虫啉、啶虫脒的方法。样品经乙腈甲酸溶液（99〖KG-3∶〖KG-51，V/V）均质提取，采用C18、强阴离子交换剂（SAX）、N丙基乙二胺（PSA）和无水MgSO4混合吸附剂分散萃取处理，以HSST3色谱柱分离，采用电喷雾（ESI）正负离子同时扫描和可编程多反应监测模式（SMRM）检测，基质匹配溶液外标法定量。6苄氨基嘌呤、多效唑、烯效唑、氯吡脲、甲哌啶、吡虫啉、啶虫脒在1～200μg/L和2，4二氯苯氧乙酸、对氯苯氧乙酸、赤霉素、吲哚乙酸、萘乙酸、吲哚丁酸在5～1000μg/L范围内线性良好（R2>0.99）。13种化合物加标回收率在73.1%～108.9%之间，RSD（n=6）值在0.6%～8.0%之间，方法检出限（LOD，S/N=3）和定量限（LOQ，S/N=10）分别为0.18～9.68μg/kg和0.61～32.26μg/kg。本方法简便、稳定、灵敏，能够满足实际检测需求。
　　关键词茶叶；植物生长调节剂；吡虫啉；啶虫脒；超高效液相色谱串联质谱；分散固相萃取
　　1引言
　　植物生长调节剂（Plantgrowthregulators，PGRs）是一类与植物激素具有相似生理和生物学效应的农药（来源包括人工合成及生物中提取），自20世纪30年代以来，因其效用高、用量小、残毒少等特点，广泛应用于果蔬、茶叶等农业生产领域，如赤霉素[1]、吲哚丁酸[2]、奈乙酸[3]等可通过改变茶树体内的生物合成、运转和分布，调节新梢生理过程，并促进茶树早发、多发，提高产量及品质。吡虫啉和啶虫脒属于烟碱类新型广谱杀虫剂，在茶园中应用也十分普遍[4，5]。然而随着植物生长调节剂和烟碱类农药用量增多及使用范围日益扩大，其安全性也备受关注。研究表明，2赤霉素可能增加肿瘤形成风险[6]，吲哚乙酸可影响心肌功能[7]，2，4二氯苯氧乙酸（2，4D）具有生殖毒性[8]，多效唑存在致畸作用[9]。因此，欧盟、日本、中国等建立了PGRs和烟碱类农药相关限量标准，如欧盟规定2，4D在蓝莓、茶叶中的最高残留限量值（MRL）为0.1mg/kg；日本規定赤霉素在柠檬等果蔬中的MRL为0.2mg/kg；我国GB27632014中规定氯吡脲在葡萄中的MRL为0.05mg/kg，吡虫啉在茶叶中的MRL为0.5mg/kg[10]等。
　　目前，植物生长调节剂和烟碱类农药主要检测方法包括色谱法[11～13]、色谱质谱法[14～19]等，但绝大部分方法都需要经过传统固相萃取、浓缩、衍生等前处理步骤，存在操作程序繁琐、污染严重、抗干扰差等缺点。前处理作为关键技术，2会直接影响方法灵敏度和精密度。茶叶具有典型基质效应，一般方法很难直接适用，迄今尚未发现同时测定茶叶中多PGRs及烟碱类农药残留相关研究报道。本研究采用分散固相萃取前处理方法，省去浓缩、固相小柱萃取等步骤，建立了超高效液相色谱串联质谱法同时快速测定茶叶中11种植物生长调节剂及吡虫啉、啶虫脒的方法，本法灵敏、简便、高效，可满足茶叶质量监测需求。
　　2实验部分
　　2.1仪器与试剂
　　ABSciexTQ5500型串联三重四极杆质谱仪（美国Sciex公司）；LC30A超高效液相色谱仪（日本岛津公司）；MillQ去离子水发生器（美国Millipore公司）；T10高速均质仪（德国IKA公司）；高速冷冻离心机（上海卢湘仪离心机仪器有限公司）。
　　11种PGRs及2种烟碱类农药标准样品：6苄氨基嘌呤（6Benzylaminopurine，6BA）、多效唑（Paclobutrazol）、烯效唑（Uniconazole）、氯吡脲（Forchlorfenuron）、甲哌啶（Mepiquatchloride）、吡虫啉（Imidacloprid）、啶虫脒（Acetamiprid）、2，4二氯苯氧乙酸（2，4Dichlorophenoxyaceticacid，2，4D）、对氯苯氧乙酸（4Chlorophenoxyaceticacid，4CPA）、赤霉素（Gibberellicacid，GA3）、吲哚乙酸（Indole3aceticacid，IAA）、萘乙酸（1Naphthaleneaceticacid，1NAA）、吲哚丁酸（Indole3butyricacid，IBA）（纯度≥95.0%，德国Dr.Ehrenstorfer公司）。
　　甲醇、乙腈（色谱纯，TEDIA公司）；甲酸铵（99.9%）、甲酸（95%）（德国Sigma公司）；N丙基乙二胺（PSA）、强阴离子交换剂（SAX）、强阳离子交换剂（SCX，美国安捷伦科技有限公司）；C18、石墨化碳黑（GCB）、无水MgSO4、弗罗里硅土（天津博纳艾尔杰公司）。
　　茶叶样品购于浙江省各大茶叶市场。
　　2.2色谱和质谱条件
　　WatersHSST3色谱柱（100mm×2.1mm，1.7μm）；流动相A：1mmol/L甲酸铵水溶液，流动相B：1mmol/L甲酸铵甲醇溶液；梯度洗脱程序：0～1min，10%B；1～2min，10%～70%B；2～6min，70%～98%B；6～8min，98%B；8～8.1min，98%～10%B；8.1～12min，10%B。流速：0.25mL/min；进样量：1.0μL；柱温：40℃；运行时间：12min。
　　离子源：电喷雾离子源（ESI），温度500℃，电压5500V（ESI+）/ 4500V（ESI ）；雾化气（GS1）压力：334.7kPa；辅助气（GS2）压力：334.7kPa；气帘气（CurtianGas）压力：241.3kPa。定性与定量离子对、去簇电压（DP）、碰撞能量（CE）等参数见表1。
　　2.3样品制备
　　茶叶样品粉碎后过200μm筛，称取2.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入乙腈甲酸溶液（99〖KG-3∶〖KG-51，V/V）10mL，涡旋振荡1min，18000r/min均质提取2min，10000r/min低温离心10min（5℃），取上清液1mL至装有100mgC18，50mgSAX，25mgPSA和50mg无水MgSO4吸附剂的2mL离心管中，涡旋1min，10000r/min离心5min，上清液过0.22μm滤膜，待液相色谱串联质谱分析。

相关热词搜索：调节剂 高效 色谱 串联 测定