四川若尔盖产麻花艽药材HPLC指纹图谱研究

　　摘要：目的 建立四川若尔盖地区产麻花艽Gentiana straminea Maxim.药材HPLC指纹图谱。方法 以龙胆苦苷为内参照物，分析10批麻花艽药材的HPLC色谱行为，同时以当地产近缘种黄管秦艽Gentiana officinalis H.Smith及国家药典品种粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.为外类群进行比对。色谱条件：Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-0.02%乙酸水梯度洗脱；体积流量：1 mL/min；检测波长：240 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 ?L。结果 标定16个共有峰，确定其中2个峰的归属，建立了可与上述2个外类群相区别的麻花艽指纹图谱。结论 该图谱基本反映了四川若尔盖地区产麻花艽化学背景特征，可为道地药材评价及相关中藏药品种鉴定提供基础资料。
　　关键词：四川若尔盖；麻花艽；高效液相色谱法；指纹图谱；道地药材
　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.03.019
　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）03-0049-03
　　若尔盖县位于四川阿坝藏族羌族自治州北部，青藏高原东缘地带，境内药用植物资源丰富，盛产多种中藏药材，而麻花艽Gentiana straminea Maxim.是常见品种之一。我们在实地考察及标本采集中注意到，该产区内还常见形态与麻花艽颇为相似的近缘种黄管秦艽Gentiana officinalis H. Smith；同时，四川阿坝州还分布有粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.等其他近缘种类[1]。
　　中药秦艽为多来源品种，基源植物除麻花艽Gentiana straminea Maxim.外，还包括龙胆科其他3种植物：秦艽Gentiana macrophylla Pall.、粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.及小秦艽Gentiana dahurica Fisch.[2]。但实际情况较为复杂，一些非国家药典品种在不同地区亦作秦艽药用[3-4]，同时，药典部分品种以及近缘种类作为藏药解吉的原植物在我国藏区广泛使用[5]，品种呈现多样化。
　　为此，我们在前期工作基础上[6-9]，收集10批当地产麻花艽及1批黄管秦艽样品，并以黄管秦艽及国家药典品种之一粗茎秦艽为外类群，拟建立可反映该道地产区化学特征、并具有一定种间鉴别意义的麻花艽药材高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，以期为该地区产麻花艽药材品质评价及相关中藏药品种鉴定提供基础资料。
　　1 仪器及试药
　　Agilent1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；超声仪（上海之信有限公司）。龙胆苦苷对照品（上海中药标准化中心提供），马钱苷酸对照品（购自上海同田生物技术有限公司）。乙腈为色谱纯（LEDA），水为娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。
　　2 试验样品来源与凭证标本
　　所有样品均为自采，原植物经上海中医药大学赵志礼教授鉴定为麻花艽Gentiana straminea Maxim.、黄管秦艽Gentiana officinalis H. Smith及粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.（见表1），凭证标本保存于上海中医药大学中药学院药用植物标本室。
　　3 方法与结果
　　3.1 色谱条件
　　色谱柱：Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：乙腈（A）-0.02%乙酸水（B），A为0～20 min（10%～13%）， 20～40 min （13%～45%），40～50 min（45%～90%）；体积流量：1 mL/min；检测波长：240 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 ?L。
　　3.2 对照品溶液的制备
　　分别取龙胆苦苷和马钱苷酸适量，加甲醇溶解，制成0.26、0.16 g/L的混合对照品溶液，冷藏备用。
　　3.3 供试品溶液的制备
　　取药材粉末约0.5 g，精密称定，置于25 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称重，超声处理（功率120 W，频率40 kHz） 30 min，取出，冷却后补重，摇匀，静置，取续滤液即得。
　　3.4 方法学考察
　　3.4.1 精密度试验 取8号（2010SC010）同一样品供试液连续进样6次，测得各共有峰相对保留时间RSD<1.0%，各共有峰相对峰面积RSD<3.0%。表明仪器精密度良好。
　　3.4.2 稳定性试验 取8号（2010SC010）同一供试液，分别在0、4、12、24、48 h测定，测得各共有峰相对保留时间RSD<1.0%，各共有峰相对峰面积RSD<3.0%。表明供试液在48 h内检测是可行的。
　　3.4.3 重复性试验 取8号（2010SC010）同一样品5份，分别制备并测定，测得各共有峰相对保留时间RSD<1.0%，各共有峰相对峰面积RSD<3.0%。表明该方法重复性良好。
　　3.5 指纹图谱及技术参数
　　3.5.1 样品测定 按“3.1”项下色谱条件对10批麻花艽供试液及混合对照品溶液分别进行色谱测定；同时测定外类群11号黄管秦艽（2010SC008）及12号粗茎秦艽（2008LD09）供试液。
　　3.5.2 参比峰的选择 在各批次图谱中，龙胆苦苷色谱峰（6号峰）分离良好，峰位居中，峰面积较大，且为所有样品共有，故确定龙胆苦苷为参照物。

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