烤烟存储期间烟叶酶活性变化的初步研究

　　摘要 [目的]探究初烤烟存储过程中烟叶相关酶活性变化。[方法]以烤烟品种 NC89 为材料，研究皖南地区烟叶存储过程中多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）、脂氧合酶（LOX）、苯丙氨酸裂解酶（PAL）活性随存储时间延长的变化趋势。[结果]随着存储时间变长，几种酶活性均呈现先上升后下降的趋势。其中多酚氧化酶、脂氧合酶和苯丙氨酸裂解酶活性在存儲180 d时分别达到最大值[50.50 U/g，34.20、0.54△OD/（g·min）]，而过氧化物酶活性则在存储270 d时达到最大值（118.90 U/g）。[结论]该研究为进一步丰富烟叶陈化理论，探究烤烟存储质量提升形成机理提供了参考。
　　关键词 烤烟；存储；酶活性
　　中图分类号 TS41+1文献标识码 A文章编号 0517-6611（2018）15-0001-02
　　Abstract [Objective]To explore the activity changes of related enzymes in flue-cured tobacco leaves during storage. [Method]We studied the activity change trends of polyphenol oxidase （PPO）， peroxidase （POD）， lipoxygenase （LOX） and phenylalanine lyase （PAL） in tobacco leases with the extension of storage time based on NC89 flue-cured tobacco as experimental material in south Anhui. [Result]As the storage time increased， the activity of four enzymes showed a tendency of increasing first and then decreasing. The maximum activity of polyphenol oxidase， lipoxygenase and phenylalanine were reached when the tobacco were stored 180 days. The maximum were 50.50 U/g， 34.20， 0.54 △OD/（g·min）， respectively， while the peroxidase activity reached the maximum（118.90 U/g） when the tobacco were stored 270 days.[Conclusion]The study provides a reference for further eiching the theory of tobacco leaf aging and exploring the mechanism of improving the quality of flue-cured tobacco during storage.
　　Key words Flue-cured tobacco；Storage；Enzyme activity
　　烟叶陈化能够改善烟叶的香味品质，是提高烟叶可用性的重要环节[1]。在烟叶存储期间，烟叶内各种化学变化借助自然气候的变化加速进行，从而改善烟叶品质和理化性状，这一过程被称为自然陈化。酶类是陈化过程中提高烟叶发酵质量的动力，是烟叶陈化的主要机理之一[2]。烤烟存储过程中，在酶类的作用下烤烟烟叶中的多种物质氧化分解形成重要的香气成分，多酚氧化酶、过氧化物酶、脂氧合酶和苯丙氨酸裂解酶则是其中主要的酶类，对促进烟叶陈化发酵、提高烟叶品质具有积极作用。前人[3-6]对初烤烟存储期间相关酶的活性变化进行了大量的研究。为了进一步丰富烟叶陈化理论、探究烤烟存储质量提升形成机理，笔者以皖南地区存储烤烟为材料，研究了烤烟在陈化过程中多酚氧化酶、过氧化物酶、脂氧合酶、苯丙氨酸裂解酶活性的变化。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　以烤烟品种NC89初烤烟为材料，烘烤后于自然条件下储存。每隔45 d取1次样，烟叶去主脉，干燥、粉碎后备用。
　　1.2 方法
　　1.2.1 多酚氧化酶活性测定。参照朱广廉等[7]的方法：取1 g样品，加入预冷的0.05 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.8）1 mL，研磨，再加1 mL缓冲液，倾入5 mL离心管，于4 ℃、10 000 r/min离心20 min，收集上清液。反应体系为3 mL 0.2 mol/L邻苯二酚（用pH 7.8磷酸缓冲液配制），1 mL酶液，以灭活酶液作为空白对照，于30 ℃下水浴10 min，立即用20%三氯乙酸中止反应。5 000 r/min离心10 min后，取上清液于495 nm处测定其吸光值。
　　1.2.2 过氧化物酶活性测定。参照李玲等[8]的方法：取1 g样品，加入0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0），在冰浴中研磨，12 000 r/min离心20 min，收集上清液。4.7 mL反应液包括2.7 mL 0.05 mol/L磷酸缓冲液（pH 5.5），1.0 mL 2%的H2O2，1.0 mL 0.05 mmol/L愈创木酚。向反应液中加入0.3 mL 酶液（空白管为0.3 mL pH 7.0的磷酸缓冲液）混匀后，水浴 37 ℃反应15 min，冷却后测定其在470 nm处的吸光值。
　　1.2.3 脂氧合酶活性测定。参照宫长荣等[9]的方法：取0.5 g样品，加入0.10 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.0）在冰浴中研磨，12 000 r/min离心20 min，收集上清液。取0.3 mL酶液于试管中，加入2 mL底物乳状液（2.24 mmol/L亚油酸分散于含0.5 μL/mL吐温-20的0.1 mol/L、pH 9.0的硼酸缓冲液中），混匀后放入30 ℃水浴中并开始计时，反应3 min后加入5 mL无水乙醇终止反应，然后加入5 mL蒸馏水混匀并测定其在234 nm处的吸光值。

相关热词搜索：烤烟 烟叶 活性 变化 研究