QuEChERS结合HPLC—MS/MS法测定鲜烟叶中的2种抑芽剂

　　摘要：建立鲜烟叶中二甲戊乐灵、仲丁灵2种抑芽剂的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法。以乙腈为提取溶剂，对鲜烟叶中2种抑芽剂进行提取，采用新型复合吸附剂的QuEChERS净化方法，用N-丙基乙二胺（PSA）、C18和石墨化碳黑（GCB）3种复合吸附剂净化，HPLC-MS/MS测定，以电喷雾正离子模式（ESI+），iFunnel离子聚焦，多反应监测（MRM）模式下进行检测，基质匹配外标法定量。通过优化条件，在10～500 μg/kg范围内，二甲戊乐灵、仲丁灵的检测线性相关系数（R2）均大于0.995，检出限（LOD）为1.5～2.4 μg/kg，定量限（LOQ）为5.0～7.9 μg/kg，在3个添加水平下的回收率范围88.1%～96.4%，相对标准偏差（RSD）为3.2%～9.3%。试验方法可用于鲜烟叶中二甲戊乐灵、仲丁灵抑芽剂的准确测定。
　　关键词： QuEChERS；复合吸附剂；抑芽剂；鲜烟叶；高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）
　　中图分类号：O657.7；TS41+1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）11-2888-04
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.11.045
　　烟草抑芽剂主要包括马来酰肼、二甲戊乐灵、仲丁灵和氟节胺4种，可以提高烟叶产量和品质，其中二甲戊乐灵、仲丁灵（图1）在烟叶中的残留量较低，成为了目前成熟、研究多、应用广泛的2种烟草抑芽剂[1，2]，但有研究表明这2种抑芽剂可以毒害细胞并损害DNA，引发直肠癌和肺癌[3-5]。2014年，食品安全国家标准规定二甲戊乐灵和仲丁灵这2种抑芽剂的每日允许摄入量（ADI）分别为0.03和0.2 mg/kg[6]。抑芽剂关系到烟草质量安全，生产者需要对抑芽剂使用以及在鲜烟叶中的残留进行监测，以防止抑芽剂的滥用[7，8]。因此，建立快速、准确、灵敏的鲜烟叶中抑芽剂的检测方法迫在眉睫。
　　已有关于不同基质中抑芽剂类物质分析方法的研究报道，常见的前处理方法有液液萃取（LLE）[9]、固相萃取（SPE）[10]、凝胶渗透色谱法（GPC）[11，12]和QuEChERS[13，14]，这几种方法都存在一些不足之处，如LLE有机溶剂消耗量大，SPE操作复杂，GPC方法重现性不好。经典的QuEChERS方法虽简便快速，但采用单一吸附剂难以去除鲜烟叶中对质谱检测干扰较大的叶绿素、糖类、脂肪酸等杂质，也无法适用于鲜烟叶中抑芽剂的残留分析。关于鲜烟叶中抑芽剂的检测方法，国内鲜有相关文献报道，本研究采用新型复合吸附剂的QuEChERs净化方法，有效地去除鲜烟叶中杂质的干扰，结合HPLC-MS/MS技术，能够快速、简便、准确地测定鲜烟叶中二甲戊乐灵、仲丁灵2种抑芽剂的残留。
　　1 材料与方法
　　1.1 仪器与试剂
　　仪器：Agilent 1290高效液相色谱仪、Agilent 6490三重四极杆质谱仪（美国Agilent公司）；涡旋混合器（美国Scientific Industries公司）；离心机（美国Beckman Coulter公司）；超纯水系统（美国Millipore Milli-Q Gradient公司）；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；氮吹仪（美国Caliper LifeSciences公司）；SR-2DS型水平振荡器（日本TATEC公司）。
　　试剂：甲醇、乙腈（色谱纯，美国Fisher Scientific公司）；石墨化碳（GCB）、N-丙基乙二胺（PSA）、C18（天津Agela Technologies公司）；二甲戊乐灵、仲丁灵（德国Dr. Ehrenstorfer公司）；甲酸（色谱纯，美国Sigma公司）；无水MgSO4、NaCl（分析纯，上海国药集团）。
　　标准溶液：准确称取二甲戊乐灵和仲丁灵标准品（精确至0.000 1 g），用甲醇分别溶解并配制成100.0 mg/L的标准储备液；混合2种标准溶液，临用前取标准储备液用甲醇稀释成10 mg/L的标准溶液，储存于4 ℃冰箱中备用。
　　1.2 试验方法
　　1.2.1 提取 取适量鲜烟叶，去除主脉，剪碎后放入均浆机中充分绞碎。准确称取绞碎的样品2.0 g，置于50 mL具塞离心管中，加入10 mL乙腈，在水平振荡器上振荡提取10 min，然后加入1.0 g无水MgSO4和0.5 g NaCl，立即涡旋1 min，防止无水MgSO4结块，最后以5 000 r/min离心8 min。
　　1.2.2 净化 吸取2.0 mL离心后的上清液，将上清液转移至装有30 mg C18、50 mg PSA和10 mg GCB吸附剂的5.0 mL离心管中，涡旋2 min，5 000 r/min离心3 min。吸取1.0 mL的上清液，用氮气吹至近干，残留物用甲醇∶水（9∶1，V/V）定容至1.0 mL后过0.22 μm滤膜，供HPLC-MS/MS分析。
　　1.3 测试条件
　　高效液相色谱条件Agilent Eclipse XDB-C18 column（150 mm×4.6 mm，5 μm），在线过滤器（Agilent 公司）；流动相A为甲醇，B为0.1%（V/V）甲酸水溶液；等度洗脱甲醇∶0.1%甲酸水（90∶10，V/V）；流速0.4 mL/min；运行时间13.0 min；柱温40 ℃；进样体积5 μL。
　　质谱条件：电喷雾离子源（ESI），正离子模式；毛细管电压3 500 V；雾化气压力1.4×10-5 Pa（20 psi）；干燥气温度250 ℃；干燥气流量15 L/min；鞘气温度300 ℃；鞘气流量11 L/min；采集方式多反应监测模式（MRM），其他参数见表1。

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