含马兜铃酸类中药材中马兜铃总酸的含量

　　摘 要：马兜铃酸是一种肾毒素，具有一定的生理活性，但也能造成肾小管大量丧失，导致肾衰竭。在应用含马兜铃酸类中药材时，应当严格控制其用量，尽可能避免其毒副作用。本文基于一种马兜铃总酸的含量测定方法，测定目前市售的几种含马兜铃酸类中药材中马兜铃总酸含量，以指导临床用药。
　　关键词：马兜铃酸 含量 中药材
　　中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：1003-9082（2018）10-00-01
　　马兜铃酸为硝基菲类有机酸类化合物，天然存在于诸如马兜铃属与细辛属等马兜铃科植物中，此外，在依靠吸食这类植物生存的蝴蝶体内，也存有一定量的马兜铃酸。此类马兜铃科植物曾广泛地被中医作为原生药材入药。但同时马兜铃酸也是一種较为严重的致病因素，有相关的文献报道，马兜铃酸是一种肾毒素，可导致马兜铃酸肾病等严重疾病，同时还具有致癌作用及致突变作用。2017年10月27日，在世界卫生组织国际癌症研究机构公布的一份致癌物清单中，马兜铃酸、含马兜铃酸的植物均在其列。近年来国内外的临床治疗中，因服用过量的马兜铃酸而导致肾衰竭的病例也不在少数。
　　一、测定方法
　　本次测定以马兜铃总酸的含量为指标，用紫外分光光度法测定市售的不同产地含马兜铃酸类中药材中马兜铃总酸含量。紫外分光光度法是一种较为常用的定量测定、鉴别与杂质检查方法，其原理是通过测定待测物质处在不同波长时的吸光度获得待测物质的吸收光谱，结果以绘制波长与吸光度之间的关系图呈现。与其他测定方法相比较，紫外分光光度法具有较高的灵敏度，测定工作所涉及的仪器设备较为简单，操作也较为方便，选择性好，同时能够较快地获得结果，因此得到了较为广泛的应用。
　　本次测定选择的紫外可见分光光度计仪器型号为SP-752型，所测中药材为购于江苏等地的青木香，购于陕西等地的马兜铃，购于吉林等地的关木通，购于东北等地的辽细辛。无水乙醇、甲醇、甲酸、乙酸乙酯、盐酸均为分析纯。
　　二、测定步骤及结果
　　马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ在马兜铃科植物中的含量相对较高，二者被认为是马兜铃属以及细辛属植物产生毒素、致癌的重要因素。在进行待测材料的测定前先完成马兜铃酸Ⅰ对照品溶液的制备。精密称定马兜铃酸I对照品，用无水乙醇配置浓度分别为0.03，0.025，0.02，0.015，0.01，0.005mg/mL的对照品溶液，检测波长为390nm，用紫外可见分光光度计测定此时的吸光度，并以马兜铃酸Ⅰ的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制曲线，结果发现在该范围内，马兜铃酸Ⅰ的浓度与其吸光度具有良好的线性关系。
　　在进行供试品溶液的制备时，取适量药材生品粉末，精密称定0.3g。为优化马兜铃总酸的提取条件，可采用正交试验法，即用正交表安排与分析多种因素试验，在马兜铃总酸的测定中，主要考察提取溶剂的浓度、溶剂的用量以及提取的方法，以马兜铃总酸含量为参考指标安排正交试验：溶剂有浓度2.5%的氨水、浓度5%的氨水、浓度7.5%的氨水三种，溶剂的用量有40mL、50mL、60mL三种，提取的方法有冷浸过夜、超声提取15min、超声提取15min×2三种。称重并补足重量，滤过，取续滤液10mL，以6mol/L的盐酸调节pH值为2，加乙酸乙酯10mL进行4次萃取，合并有机层并用20mL水洗至中性，回收溶剂，加无水乙醇溶解残渣，定容至10mL，精密吸取2mL，用无水乙醇定容至5mL。由多次重复试验的结果分析，以60mL浓度为7.5%的氨水采用冷浸过夜的方法提取的效果最佳，且在马兜铃酸总酸含量的影响因素中，提取方法产生的影响较大，差异极为显著，其次是溶剂的用量，差异较为显著，而不同浓度的溶剂之间不存在显著差异。
　　经过上述试验分析，对马兜铃总酸的最优提取方法，以青木香为例，精密称定青木香生品粉末，过四号筛，加入60mL浓度为7.5%的氨水，经冷浸过夜，补足重量，取续滤液10mL，以6mol/L的盐酸调节pH值为2，加10mL乙酸乙酯进行4次萃取，合并有机层并用20mL水洗至中性，回收溶剂，加无水乙醇溶解残渣，定容至10mL，精密吸取2mL，用无水乙醇定容至5mL。
　　对各类含马兜铃酸类中药材的样品测定采用上述最优的提取方法，分别进行提取，并制成供试品溶液，重复测定5次计算出待测药材中马兜铃总酸含量的平均值，以完成精密度试验；同时进行重复性试验，验证方法的重复性是否良好；进行加样回收率试验，测出其平均回收率；在第0、2、6、12、24h测定含量的平均值，验证其稳定性。试验数据使用SPSS 19.0 软件进行分析，检测结果中，不同产地的含马兜铃酸类中药材的马兜铃总酸含量为0.164%-0.734%，其中青木香的总酸含量为0.563%，马兜铃的总酸含量0.527%，关木通的总酸含量0.734%，辽细辛的总酸含量0.164%。
　　三、讨论
　　本次试验采用紫外分光光度法，对不同地区市售的几种含马兜铃酸类中药材的马兜铃总酸含量进行测定，以指导临床治疗中马兜铃酸类中药材的应用。本次测定的药材包括江苏等地的青木香、陕西等地的马兜铃、吉林等地的关木通、东北等地的辽细辛。测定结果发现，不同产地的含马兜铃酸类中药材的马兜铃总酸含量介于0.164%-0.734%之间，其中关木通的总酸含量最高，达到0.734%，辽细辛的总酸含量最低，为0.164%。
　　紫外分光光度法是一种较为常用的定量测定方法，定量测定时，在最大的吸收波长处，对一定浓度的样品溶液的吸光度进行测量，并与待测溶液的吸光度进行比较，从而计算出待测溶液的浓度。此外，也可以采用吸收系数法求算。本次试验所用的紫外分光光度计，是根据待测物质的吸收光谱，对其结构、成分以及物质之间的相互作用进行研究的有效手段。紫外分光光度计的自动化程度较高，应用更加开放灵活，具有较强的兼容性，操作简单，便于维护，因而具有较高的效率。基于本文所述的方法测定含马兜铃酸类中药材马兜铃总酸的含量，能够迅速得到准确的结果，从而为临床的应用提供相应的数据参考。
　　参考文献
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