比色法测定铁皮石斛药材中多糖的含量

　　摘 要：本文为了比较考察组培移栽和野生铁皮石斛药材中的多糖含量。以苯酚-浓硫酸法，多糖水解成单糖并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成橙黄色化合物，在490nm处比色测定吸收度，并以葡萄糖为对照品建立标准曲线测定样品的多糖含量。标准曲线葡萄糖含量在0.0～100.0μg范围内线性良好，r =0.9998。组培移栽和野生铁皮石斛药材的多糖含量分别为13.11%和14.37%。 结构表明苯酚-浓硫酸法测定多糖准确稳定、简便易行，组培移栽和野生的铁皮石斛药材多糖含量相当。
　　关键词：铁皮石斛；多糖；含量测定
　　中图分类号：S567.2 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20151131011
　　铁皮石斛是一种名贵的具有养阴补益作用的中药材。《神农本草经》记载，铁皮石斛“补五脏虚劳羸瘦、强阴、久服厚肠胃。”《本草纲目》中评价铁皮石斛“强阴益精，久服厚肠胃，补内绝不足，平胃气，长肌肉，轻身延年......。”2010年版《中国药典》记载其功能与主治为“益胃生津，滋阴清热。用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明。”
　　由于铁皮石斛野生药材来源稀少，不能满足市场需求，现组培繁殖移栽的种植方法发展很快。由于铁皮石斛中的多糖是主要的活性成分，为更好地了解和控制药材品质，本文对组培移栽和野生的铁皮石斛药材样品的多糖含量进行了比较考察。
　　1 仪器与试药
　　仪器：UV-1900 紫外-可见分光光度计，sartorius BS110S电子分析天平（德国）；试剂：硫酸，无水乙醇，苯酚均为分析纯；对照品：无水葡萄糖（HPLC法含量98.82%），使用前于105℃恒温烘干至恒重；样品：组培移栽样品由学院相关老师提供，野生药材样品购自金华市九德堂药店
　　2 方法与结果
　　2.1 标准曲线的制备
　　2.1.1 对照品贮备液的制备
　　精密称取0.1012g葡萄糖对照品于100mL烧杯中，加水溶解，定容至1000mL容量瓶中，摇匀，即得葡萄糖对照品贮备液（100μg·mL-1）。
　　2.1.2 对照品溶液的制备及比色测定
　　分别吸取0、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL的葡萄糖对照品贮备液（100μg·mL-1）置20mL具塞试管中，用蒸馏水补至1.0mL，分别得到质量浓度为0、20、40、60、80和100μg·mL-1的系列对照品溶液。向各溶液中加入1.0mL苯酚溶液（5%），然后快速加入5.0mL浓硫酸（于液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合），静置10min，振摇使反应液充分混合，沸水浴中加热15min，冷水冷却至室温，在490nm处测定吸光度。
　　2.1.3 线性关系考察
　　以葡萄糖质量浓度C为横坐标，吸光度值A为纵坐标，制定标准曲线，并作线性回归，得到吸光度A与质量浓度C的回归方程为：A=0.0070C+ 0.0022， r= 0.9998（n=6），葡萄糖浓度在0～100μg范围内线性良好。见图1。
　　2.2 样品的测定
　　2.2.1 供试品溶液的制备
　　取烘干后样品0.lg，加入80%乙醇10mL，回流1h，过滤。收集药渣，往其中再次加入80% 乙醇，重复上述步骤2次，以去除样品中可能含有的甙类等干扰性成分。乙醇提取后的药渣加入3mL 蒸馏水，沸水浴提取1h 后过滤，收集提取液，药渣重复提取2次，合并3次所得提取液定容至10mL 后稀释100 倍；取1mL置20mL具塞试管中，加苯酚试剂1mL 混匀，再加浓硫酸5mL，混匀，静置5min，沸水浴中加热15min，冷水冷却至室温，即得样品溶液。
　　2.2.2 药材样品的多糖含量
　　上述样品溶液于490nm 处比色测定吸收度，重复3次，同时作空白试验。在葡萄糖对照品标准曲线上查得样品溶液的糖含量，并根据投料量、稀释倍数计算药材中的多糖含量。结果组培移栽的铁皮石斛药材中的多糖平均含量为13.11%，野生铁皮石斛药材的多糖平均含量为14.37%。
　　3 讨 论
　　石斛这一药材在2005年版和2010年版《中国药典》中均有收载，其中在2010年版药典中还增加了含量测定项目，规定石斛碱含量不少于0.40%，毛兰素含量不少于0.03%[1]。这些特征性成分虽然对于控制药材质量有重要作用，但作者认为多糖是铁皮石斛中的主要有效成分。铁皮石斛具有明显的提高免疫功能的作用，这与多糖的基本活性是一致的。本文稿主要选取多糖指标来考察组培移栽与野生药材的品质。
　　李满飞等提出的苯酚-浓硫酸法测定多糖含量，在后来的相关研究中得到了广泛的应用[2]。本文研究结果表明组培移栽和野生铁皮石斛药材的多糖含量分别为13.11%和14.37%，2者相当。说明组培移栽的方法种植铁皮石斛以替代野生药材是可行的，可以缓解野生铁皮石斛药材匮乏的问题。何铁光等[3]经测定野生铁皮石斛1a生茎多糖含量为148. 94mg/g，多年生茎多糖含量为268. 21mg/g，提示本研究中所用的野生铁皮石斛药材是1a生的。
　　参考文献
　　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：85-87.
　　[2] 李满飞，徐国钧，平田正等.中药石斛类多糖的含量测定[J].中草药， 1990，21（10）：10-12.
　　[3] 何铁光，苏江，王灿琴等.铁皮石斛不同来源材料多糖和氨基酸含量的比较[J].广西农业科学，2007，38（1）：32-34.
　　作者简介：郑柏勤（1966- ），男，副教授、高工，从事生物制药教学与科研工作。

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