炮制对柴胡药材中4种柴胡皂苷的影响

　　【摘要】目的 ：了解炮制对柴胡药材中4种柴胡皂苷的影响。方法 ：采用高效液相色谱法，对柴胡不同炮制品提取物中组分进行测定。结果： 经炮制后，4种柴胡皂苷含量出现明显变化。结论 ：高效液相色谱法方法操作简便、重现性良好，在柴胡及炮制品中柴胡皂苷含量测定中具有重要的指导作用，能为其质量控制提供可参考依据。
　　【关键词】炮制；柴胡；柴胡皂苷
　　【中图分类号】R242【文献标识码】A【文章编号】2095-6851（2014）08柴胡属于临床上的一种常用中药，主要炮制品包括三类：一是生柴胡，二是醋柴胡，三是酒柴胡。在临床上，其炮制品功效具有明显差异，生柴胡具有很强的升散作用，解表退热功效显著；醋柴胡具有止痛、疏肝和血之功效；酒柴胡升散散邪作用显著[1]。现代医学研究表明，柴胡中柴胡皂苷a、d为关键有效成分，对柴胡进行炮制，发现柴胡皂苷b1、b2含量存在上升现象，可作为质量评价指标[2]。为了深入探究炮制对柴胡药材中4种柴胡皂苷的影响，本试验主要采用高效液相色谱法，构建酒柴胡、醋柴胡、生柴胡中柴胡皂苷a、b1、b2、d含量测定法，并观察4种柴胡皂苷含量变化状况，相关报告如下。
　　1仪器、试药与方法
　　1.1 仪器及试药
　　（1）仪器：双波长紫外检测器、高效液相色谱仪（Waters 600型）、色谱工作站（Empower型）、超声波清洗器（济宁丰鑫超声设备有限公司，KQ-50DB型）、电子分析天平（_北京京科瑞达科技有限公司，METTLER-AE 240型）、粉碎机（江阴市永昌机械有限公司，FW177 型）；（2）试药：柴胡药材（购于当地药材市场，经试验鉴定为北柴胡干燥根）、柴胡皂苷a、b1、b2、d（分离制备，经H-NMR鉴定结构并测定均纯度>97%）、乙腈、米醋、黄酒（江西省荣华调味品厂）。酒柴胡、醋柴胡制备借鉴1988版《全国中药炮制规范》中的炮制通法，炮制品成品率依次为94.5%、96.1%。
　　1.2 一般方法
　　1.2.1 色谱条件
　　（1）Hypersil ODS色谱柱：4.6mm×250mm；（2）流速：1.0mL/min-1；（3）流动相：乙腈-水、梯度洗脱；（4）波长：210nm及254nm；（5）柱溫：30℃；（6）进样量：10μL；（7）柴胡皂苷理论塔板数：a>7000，b1>6500，b2>5000，d>4000。
　　1.2.2 供试品溶液制备方法
　　择取柴胡炮制品，待烘干后粉碎，取70目粉末（1.0g）烘干达至恒重并置入具塞三角瓶中，添入50mL、%氨性甲醇溶液，待浸润30min后超声60min，补充甲醇静置取25mL上清液并放置于蒸发皿中，待浓缩至干后移至量瓶（5.0mL）中，通过微孔滤膜滤过可获取。
　　1.2.3 对照品溶液制备方法
　　称取各柴恒重胡皂苷对照品，置于量瓶（10mL）中，待超声溶解后稀释摇匀，获取0.18g/L-1柴胡皂苷a、20.09g/L-1柴胡皂苷b2、10.10g/L-1柴胡皂苷b1、0.19g/L-1柴胡皂苷d。
　　1.2.4 线性关系分析
　　吸取柴胡皂苷d、a对照品溶液20、15、12、8、4、1μL及柴胡皂苷b2、b1对照品溶液10、8、4、2、1μL，将液相色谱仪注入其中，观察峰面积变化，并以此为纵坐标，取进样量为横坐标，获取柴胡皂苷a、b1、b2、d回归方程。
　　1.2.5 精密度、重复性及加样回收率实验
　　取1份醋柴胡样品，进行供试品溶液制备并测定峰面积。同时，取5份醋柴胡样品，吸取10.0μL供试品溶液，进行重复性试验。另外，称取9份醋柴胡粉末，0.5g/份，划分为3组，依据供试品溶液制备方法进行操作，计算加样回收率。
　　2结果
　　2.1 精密度、重复性及加样回收率实验结果
　　（1）精密度实验结果：柴胡皂苷a、b1、b2、d峰面积RSD值分别为1.5%，2.1%、0.8%、1.1%，提示精密度处于良好状态；（2）重复性实验结果：RSD值依次为1.5%、2.1%、1.9%、1.7%，提示重复性良好；（3）加样回收率实验结果：RSD值依次为1.31%、0.52%、1.15%、1.25%。
　　2.2 柴胡皂苷a、b1、b2、d测定结果
　　于生柴胡中，柴胡皂苷a、b1、b2、d依次为2.644g/L-1、0.048g/L-1、0.122g/L-1、2.096g/L-1，于醋柴胡中，依次为1.771g/L-1、0.280g/L-1、0.168g/L-1、1.251g/L-1，于酒柴胡中，分别为3.080g/L-1、0.980g/L-1、0.531g/L-1、2.740g/L-1，表明不同柴胡炮制品中皂苷含量存在明显差异。
　　3讨论
　　通常而言，在炮制过程中，柴胡存在结构转化现象。譬如柴胡皂苷a极其容易转变为b1，而d易变为b2。从某种角度上来讲，以往主要以柴胡皂苷a、d含量为关键质量评定指标，但其评价体系无法完全表达柴胡炮制品的品质。本文研究结果发现，不同柴胡炮制品中皂苷含量存在明显差异，醋制品中柴胡皂苷d、a含量较生品低，其对应降解产物b1、b2含量且较生品高，多由于a、d结构处于不稳定状态，于炮制中，基于加热条件下，再加上米醋中酸性物质影响下，极其容易出现结构转化现象，转变为柴胡皂苷b1、b2，而柴胡皂苷b1、b2药理作用显著[3]。在醋制过程中，柴胡皂苷a、d降解产物不仅局限于柴胡皂苷b1、b2，其降解产物可能存在降解过程，具体机制尚待研究。于酒柴胡中，柴胡皂苷a、b1、b2、d含量高于醋柴胡及生柴胡。究其根源，黄酒成分较为复杂，伴有葡萄糖、麦芽糖、糊精、含氮物、琥珀酸、氨基酸及甘油等，在酒制中易激活植物体内酶，促使柴胡皂苷发生转变[4]。
　　综上所述，炮制对柴胡药材中4种柴胡皂苷具有重要的影响，其具体作用机制尚需进一步探究。
　　参考文献
　　[1]黄帅，马淼，黄倩倩，等.一测多评法同步测定柴胡药材中3种皂苷的含量[J].时珍国医国药，2010，23（04）：838-840.
　　[2]曹海禄，魏建和，何春娥，等.不同土壤种植下四种柴胡种质药材中常量及微量元素含量的比较研究[J].光谱学与光谱分析，2010，12（04）：1105-1108.
　　[3]章佳赟.含柴胡的常用中成药中柴胡皂苷含量的测定及研究[D].复旦大学，2010.
　　[4]曹恒涛，鲁静，林瑞超，等.重楼药材中4种重楼皂苷含量测定的对照品替代方法研究[J].药物分析杂志，2011，25（09）：1641-1645.

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