超微粉碎技术对三七药材粉碎效果及有效成分含量的影响

　　[摘要] 该实验主要研究了超微粉碎技术对三七药材粉碎效果及有效成分含量的影响。以三七微粉粒径大小为指标，利用马尔文粒径测定仪测定粉碎不同时间所得到三七微粉的粒径并采用HPLC-ELSD对三七超微粉碎前后，人参皂苷Rg₁，Rb₁和三七皂苷R₁的含量进行了测定。结果显示超微粉碎2 h的药材粉末粒径均一，达到了细胞级粉碎，D₅₀约为9.599 μm，粒径分布为单峰，粉碎0.5，1，1.5 h的粒径分布均为双峰；超微粉碎0.5，1，1.5，2 h所得三七微粉中3种皂苷类成分总量分别为7.7%，7.5%，7.5%，8.3%，普通粉碎所得三七药粉中的3种皂苷总量约为5.0%，通过以上实验可以看出：超微粉碎与否对三七粉粒径均匀度及其主要成分含量有很大影响；与普通粉碎药粉相比，超微粉碎2 h药粉粒径较为均一，3种皂苷含量明显增加，为临床减少三七用药剂量及合理利用资源提供依据；但其皂苷总量与粉碎时间不成正比关系，可以结合粒径大小需求选择不同的粉碎时间。
　　[关键词] 皂苷；超微粉碎；粒径；含量
　　[收稿日期] 2013-12-27
　　[基金项目] 2009年中医药行业科研专项（200907001-5）；北京市共建项目专项
　　[通信作者] 李慧，博士，研究员，研究方向为中药新剂型研究与新药开发，Tel：（010）64014411-2957， E-mail：lihuiyiren@163.com
　　[作者简介] 王艳萍，硕士研究生，E-mail：mengtouxiaozi@163.com
　　三七为五加科人参属多年生草本植物三七Panax notoginseng （Burk.） F.H.chen的干燥根和根茎[1]，又名参三七、田七、土三七、血山草等，具有散瘀止血、消肿止痛等功效，主要应用于各种出血证，被现代中药药物学家称为“参中之王”，现代药理研究表明，三七对血液、心血管、神经、免疫等系统等均具有广泛的作用，在临床上广泛应用的名贵药材之一[2]。
　　超微粉碎是利用机械或流体动力的方法克服固体内部凝聚力使之破碎。与传统粉碎相比，超微粉碎可使中药材细胞破壁率达95%以上并且能打碎细胞，使细胞内外的有效成分充分暴露出来，提高溶出率；中药超微粉粒径一般在75 μm以下，明显提高粉末的均匀性，从而使制剂的质量得到改善。近年来，超微粉碎技术主要应用于一些贵重药材或者稀少的中药材品种上[3-4]，减少资源浪费，提高药物吸收率[5-6]。本研究主要是对三七药材进行不同时间超微粉碎，同时采用HPLC-ELSD测定3种皂苷类成分的含量，研究超微粉碎技术对三七药材粒径及有效成分含量的影响，为临床减少三七用药剂量及合理利用资源提供依据。
　　1 材料
　　WZJ-16B1振动式超微粉碎机（济南倍利粉技术工程有限公司）；安捷伦1200高效液相色谱仪（美国HP公司）；ELSD2000ES蒸发光散射检测器（Alltech公司）；Mastersizer 2000激光衍射法粒度仪结合干法进样器Scirocco 200（英国马尔文仪器有限公司）；无污染颚式破碎机（武汉微型电机厂）；DFy-600 g粉碎机（温岭市林大机械有限公司）。
　　三七药材购自西安盛兴中药饮品有限责任公司，经中国中医科学院中药研究所李先端研究员鉴定为五加科人参属多年生草本植物三七P. notoginseng （Burk.） F.H.chen的干燥根和根茎；人参皂苷Rg₁，Rb₁，三七皂苷R₁（批号分别为110703-201128，110704-201223，110745-200617），纯度大于98%，均购自中国食品药品检定研究院；乙腈（Fisher公司）为色谱纯；自制高纯水，甲醇为分析纯。
　　2 方法与结果
　　2.1 三七药材普通粉与超微粉的制备
　　2.1.1 三七普通粉的制备 称取适量三七药材，烘干，用无污染颚式破碎机破碎，呈小块状。再将破碎的三七药材用DFy-600g粉碎机粉碎后得到三七粗粉，即三七普通粉。
　　2.1.2 三七超微粉的制备 按照2.1.1项下制备三七普通粉，分为4份，再分别用振动式超微粉碎机粉碎0.5，1，1.5，2 h，用Mastersizer 2000激光衍射法粒度仪测定其粒径分布[4]，重复测量3次，统计不同粉碎时间得到的三七粉D₅₀（中位粒径）、D₉₀（90%粒径值）[7]的均值，结果见表1，各时间点的粒径分布见图1。
　　2.2 三七超微粉中人参皂苷Rg₁，Rb₁，三七皂苷R₁的含量测定
　　2.2.1 色谱条件的考察 分别采用HPLC紫外检测器和蒸发光检测器进行测定三七超微粉的样品，结果见图2，与HPLC-UV相比，HPLC-ELSD分离效果好，避免了波长在203 nm时紫外末端吸收差，基线漂移等问题，因此选用HPLC-ELSD的色谱条件来进行含量测定。
　　2.2.2 色谱条件 MERCK RP-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）-水（B），梯度洗脱：0～20 min，21%～50% A；流速1 mL·min^-1；漂移管温度105 ℃。
　　2.2.3 对照品溶液的制备 分别精密称取三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁及人参皂苷Rb₁对照品适量，加甲醇制成每1 mL分别含上述成分0.2，0.5，0.4 mg的混合对照品溶液，即得，见图3。

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