初均速法预测补骨脂药材的有效期

　　[摘要] 目的：用初均速温度加速实验法研究不同温度下药材补骨脂中有效成分补骨脂素和异补骨脂素总含量变化情况，预测补骨脂在室温（25 ℃）条件下的有效期，为评价其质量提供依据。方法：以lnV（V为反应初始速度）代替lnK（K为反应速率常数）对1/（T+273.15）作 Arrhenius图的直线，以直线斜率求活化能E_a，直线外推得室温下贮存期。结果：补骨脂在室温条件下贮存期为0.53年。结论：高温不利于补骨脂的稳定，需置于避光阴凉处保存。
　　[关键词] 初均速法；有效期；补骨脂；高效液相色谱法
　　补骨脂Psoralea corylifolia为中国和印度等国的传统民间常用药，具有温肾助阳、纳气止泻的功效，临床上用于治疗肾虚作喘、肾虚腰酸、腹痛泄泻、遗尿尿频、阳痿、遗精、早泄、出血热等^[1]。近年来国内外学者研究表明补骨脂具有抗肿瘤、增强免疫力、治疗骨质疏松、白癜风、平喘、清除胆汁、抗良性前列腺增生、肝药酶诱导、抗菌、抗病毒等作用^[2]。目前对补骨脂药理活性的研究比较广泛和深入，但其稳定性的研究报道未见。
　　为了考察补骨脂的稳定性，本文以2010年版《中国药典》收载补骨脂的质量评价以补骨脂素与异补骨脂素的总含量为依据，其含量测定法为高效液相色谱法，故本实验用HPLC测定这2种成分的总含量，预测补骨脂的有效期，为评价其质量提供实验依据。
　　1 材料
　　岛津高效液相色谱仪LC- 2010AHT，自动进样器，CLASS-VP工作站，SPD- 10AVP紫外-可见检测器，KQ3200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）， 101 型电热鼓风干燥箱（北京中兴伟业仪器有限公司），电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。
　　甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余所用试剂均为分析纯。
　　补骨脂素和异补骨脂素对照品由四川省维克奇生物科技有限公司提供，纯度≥98%，批号分别为110614，110622。补骨脂药材产地重庆合川。
　　2 方法与结果
　　2.1 补骨脂素和异补骨脂素的含量测定
　　2.1.1 色谱条件 RP-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相甲醇-水（55∶45），流速0.85 mL·min^-1，柱温30 ℃，检测波长245 nm，进样量5 μL。
　　2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取补骨脂素和异补骨脂素对照品各1.0 mg，于50 mL量瓶中，加甲醇（色谱纯）溶解，定容，制成质量浓度均为20 mg·L^-1的混合对照品溶液。
　　2.1.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过40目筛）约0.25 g，精密称定，置100 mL锥形瓶中，精密加甲醇（分析纯）50 mL，称定质量，超声30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　2.1.4 线性关系的考察 精密吸取补骨脂素和异补骨脂素混合对照品溶液，按2.1.1项下色谱条件，依次进样0.5，1，2，4，6，8，10 μL，记录各组分峰面积。以进样量（X）为横坐标，以峰面积积分值（Y）为纵坐标作回归，计算回归方程。补骨脂素的回归方程为Y=2.6×10₇X-3 380.8，r=1.000 0，线性范围0.01 ～0.20 μg；异补骨脂素的回归方程为Y=1.3×10₇X-5 250.6，r=1.000 0，线性范围0.01～0.20 μg。
　　2.1.5 精密度试验 精密吸取补骨脂素和异补骨脂素混合对照品溶液6 μL注入液相色谱仪，连续进样6次，求得补骨脂和异补骨脂素的峰面积积分值的RSD分别为0.46%，0.89%，表明仪器的精密度良好。
　　2.1.6 稳定性试验 精密称取补骨脂样品，按2.1.3项下方法制成供试品溶液，分别在0，3，6，9，12，24 h依法测定，补骨脂和异补骨脂素峰面积的RSD分别为1.0%，0.76%，结果表明供试液中补骨脂素和异补骨脂素在24 h内基本稳定。
　　2.1.7 重复性试验 精密称取补骨脂样品6份，按2.1.3项下方法制成供试品溶液，按2.1.1项下色谱条件进样5 μL，结果补骨脂素和异补骨脂素的RSD分别为0.76%，1.3%，表明本实验方法重复性良好。
　　2.1.8 加样回收率试验 称取已知补骨脂素和异补骨脂素含量的补骨脂粉末（过40目筛）6份，每份为130 mg，加入一定量的对照品，按供试品溶液制备项下方法制备溶液，按上述色谱条件进样5 μL，补骨脂素与异补骨脂素的加样回收率分别为99.77%，98.72%，RSD分别为1.2%，1.4%。
　　2.2 初均速法预测补骨脂的有效期
　　将补骨脂分装为7份，分别置于恒温干燥箱（恒温±0.2 ℃）中，于80，85，90，95，100，105，110 ℃下分别放置56，42，30，20，12，6，2 h，在规定时间内取出补骨脂，然后立即冷却至室温。每组精密称取样品3份，按2.1.3项下方法制成溶液，按上述色谱条件测定。 以室温下补骨脂素、异补骨脂素含量分别为100%，计算各温度下的含量变化，以初均速法预测补骨脂有效期，结果见表1。
　　2.3 数据处理
　　通过实验得补骨脂素和异补骨脂素在不同温度下的总分解速率V和lgV，见表1。
　　根据Arrhenius定律，以表1中的1/（T+273.15）为横坐标（X）、lnV为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程为Y=-12 952X+30.497，r=0.892 1，标准偏差s=1.094 7，〡r〡>r_0.01，5=0.874 5，线性关系显著。
　　当T=25 ℃时，lnV_{25 ℃}=-12.944 2，即V_{25 ℃}=2.390 0×10^-6。当α=0.1，f=7时，t₁-α/2，5=2.015 0，则lnV_{25 ℃}=-12.944 2±2.205 8。根据公式t_0.9，25 ℃=（100%-90%）/V_{25 ℃}，得上限为43.36年，下限为0.53年。

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