烟叶唇柱苣苔不定芽的诱导因子

　　摘要：以烟叶唇柱苣苔无菌叶片为试验材料，研究培养基pH值、无机盐浓度、蔗糖浓度、植物生长调节剂种类及配比等对不定芽诱导的影响，以期筛选出最佳诱导培养基。结果表明：不定芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L，灭菌前pH值为6.0，40d不定芽诱导率为100%，不定芽数平均为9.58个/张，生长势好。
　　关键词：烟叶唇柱苣苔；叶片；不定芽；组织培养
　　中图分类号：Q943.1文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）11-0075-03
　　苦苣苔科植物具有极重要的生物学价值和分类意义[1]，其种类繁多，全世界约有150属3000余种，我国有58属约463种[2]，其中海南省约有13属21种1变种，而特有种10种[3]。苦苣苔科植物中许多种类是重要的观赏植物、药用植物和特种蔬菜资源。烟叶唇柱苣苔（Chiritaheterotricha）是苦苣苔科唇柱苣苔属多年生草本植物，生于海拔约430m的山谷林中或溪边石上，是海南特有的野生花卉，其花冠淡紫色或白色，极为优雅，而且花期长，四季长绿，适合观赏和园艺。此外，唇柱苣苔属植物具有广泛的适应性[4]，因而烟叶唇柱苣苔具有极大的开发潜力。目前，烟叶唇柱苣苔仍处于野生状态，未进行商品化开发。由于人类活动的干扰、生态环境恶化以及自身的原因，烟叶唇柱苣苔资源逐渐减少，因此极有必要进行组织培养研究，以满足烟叶唇柱苣苔的保护和开发利用的需要。本试验以烟叶唇柱苣苔无菌叶片作为材料，较系统地研究叶片分化不定芽过程中的若干影响因素，以期筛选出最佳的不定芽诱导培养条件，快速建立烟叶唇柱苣苔组培技术体系。
　　1材料与方法
　　1.1试验材料
　　植株采自海南省保亭县。取幼叶进行表面消毒后培养获得的无菌叶片作为试验材料。
　　1.2试验方法
　　在基本培养基中添加不同种类和浓度的植物生长调节剂，除试验项目以外，所有处理中的基本培养基中含食用蔗糖30g/L、卡拉胶9g/L，灭菌前pH值为6.0，光照强度1500lx，光照时间9h/d，培养温度（26±2）℃。取无菌植株小叶片（约0.5cm×0.5cm），以叶面朝上接种于各种培养基上（图1），每个处理接种8袋，每袋3张叶，3次重复，定期观察并记录，培养40d后统计叶片不定芽诱导率和平均不定芽数。不定芽诱导率=诱导出芽叶片数/接种叶片数×100%，平均不定芽数=不定芽总数/诱导出芽叶片数。
　　1.2.1不同接种方式对不定芽诱导的影响以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L为基本培养基，接种叶片分别以叶背和叶面平放于培养基上，共2种处理。
　　1.2.2pH值对不定芽诱导的影响以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L为基本培养基，灭菌前pH值分别调至5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，共5个处理。
　　1.2.3无机盐浓度对不定芽诱导的影响以1/4MS、2/4MS、3/4MS、MS作为基本培养基，各添加6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L，共4个处理。
　　1.2.4不同种类细胞分裂素对不定芽诱导的影响以MS+NAA0.1mg/L为基本培养基，分别添加6-BA0.1mg/L、KT0.1mg/L和TDZ0.1mg/L，共3个处理。
　　1.2.5蔗糖浓度对不定芽诱导的影响以MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L为基本培养基，设置蔗糖浓度10、20、30、40、50g/L共5个处理。
　　1.2.6不同植物生长调节剂组合对不定芽诱导的影响以MS为基本培养基，设计6-BA0.1、0.5、1.0mg/L与NAA0.1、0.5mg/L不同配比，共6个处理。
　　1.3数据分析
　　采用方差分析法，F测验显著后用新复极差法进行多重比较。
　　2结果与分析
　　2.1不同接种方式对不定芽诱导的影响
　　烟叶唇柱苣苔叶片几乎无明显的愈伤组织分化，可以直接分化出不定芽。接种15d后，叶面开始膨大隆起，25d开始有小芽点萌动，40d在叶片边缘、主叶脉基部和叶面处均分化出不定芽。从表1可见，以叶背和叶面2种方式接种培养的结果差异极大，以叶背接触培养基的叶片不定芽诱导率高达100%，平均不定芽数为7.22个/张；而叶面接触培养基的不定芽诱导率只有73.91%，平均不定芽数为4.76个/张。方差分析结果表明，2种接种方式不定芽诱导率和平均不定芽数的差异均达到极显著水平，因此烟叶唇柱苣苔叶片不定芽的诱导以叶背平置于培养基上为宜。
　　2.2pH值对不定芽诱导的影响
　　由表2可知，pH值为6.0的培养基上不定芽的诱导率和平均不定芽数最高，分别为100%和7.34个/张；其次为pH值为6.5的培养基，其不定芽诱导率和平均不定芽数分别为96.30%和6.07个/张；最低的为pH值为5.0的培养基，其不定芽诱导率和平均不定芽数分别为79.17%和4.01个/张。经方差分析可知，pH值为6.0的培养基与其他培养基处理的不定芽诱导率和平均不定芽数的差异极显著，因此烟叶唇柱苣苔不定芽诱导培养基的pH值在灭菌前宜调至6.0。
　　2.3无机盐浓度对不定芽诱导的影响
　　从表3可见，除1/4MS外，其余3种无机盐浓度对叶片不定芽的诱导率均能达到100%，而平均不定芽数则随着无机盐浓度的增加而增加，呈正相关关系。MS对叶片不定芽的诱导效果最好，平均不定芽数最多，达7.23个/张，与其他处理差异极显著，且芽苗生长健壮，叶色浓绿；3/4MS的诱导效果次之，分化芽数为6.18个/张，芽生长势也好，叶绿色；1/2MS和1/4MS诱导的平均不定芽数差异不显著，但1/4MS诱导的不定芽生长势差，部分叶片出现黄化现象。说明全量MS培养基适合烟叶唇柱苣苔不定芽诱导培养。

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