HPLC-ELSD同时测定筋骨草药材中,乙酰哈巴苷和哈巴苷含量

　　摘要：目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)同时测定筋骨草药材中乙酰哈巴苷和哈巴苷含量的方法,并对不同产地和批次的筋骨草药材进行测定。方法采用Dikma C18色谱柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)；流动相A为水,B为乙腈,梯度洗脱(0～6 min,5%B；6～11 min,5%～15%B；11～17 min,15%B)；洗脱流速1 mL/min；柱温30 ℃。蒸发光散射检测器漂移管温度103 ℃,以压缩空气为雾化气,气体流速1.6 L/min。结果乙酰哈巴苷在0.017～17.32 μg、哈巴苷在0.003～1.62 μg范围内呈良好线性关系,精密度和准确性良好。福建6个批号样品的乙酰哈巴苷和哈巴苷含量较高。结论乙酰哈巴苷和哈巴苷可作为监测筋骨草药材质量的指标性成分。
　　关键词：筋骨草；乙酰哈巴苷；哈巴苷；高效液相色谱法；蒸发光散射检测器；含量测定
　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.07.026
　　中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1005-5304(2014)07-0089-04
　　Simultaneous Determination of 8-O-acetylharpagide and Harpagide in Ajuga decumbens Thunb. by HPLC-ELSDWEN Bin-yu1,2, LI Jian-rong2 (1.Kouns Pharmaceutical Co. Ltd, Postdoctoral Workstation of Zhongguancun Haidian Science Park, Beijing 100085, China；2.Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China)
　　Abstract：Objective To build an HPLC-ELSD method for simultaneous determination of 8-O-acetylharpagide and harpagide in Ajuga decumbens Thunb.；To determine Ajuga decumbens Thunb. samples from different area and of different batches. Methods Chromatographic separation was achieved on a Dikma C18 column (4.6 mm×150 mm, 5 μm). The mobile phase consisted of water (A) and acetonitrile (B), using a gradient elution of 5% B at 0-6 min, 5%-15% B at 6-11 min, 15% B at 11-17 min, and the flow rate was 1.0 mL/min. An evaporative light scattering-detector (ELSD) was used with the temperature of drift tube at 103 ℃ and the gas flow rate of air was at 1.6 L/min. Results Good linearity was shown at the concentration range of 0.017-17.32 μg for 8-O-acetylharpagide, and 0.003-1.62 μg for harpagide. The validated method was of great precision and accuracy. The contents of 8-O-acetylharpagide and harpagide in Ajuga decumbens Thunb. from Fujian province were higher than the contents in other localities. Conclusion The content of harpagide can be used as index component to monitor quality control of Ajuga decumbens Thunb..
　　Key words：Ajuga decumbens Thunb.；8-O-acetylharpagide；harpagide；HPLC；ELSD；content determination
　　
　　筋骨草Ajuga decumbens Thunb.又名金疮小草或白毛夏枯草,药用始载于《本草拾遗》,其味苦性寒,入肺、肝经,目前收录于2010年版《中华人民共和国
　　
　　基金项目：中国博士后科学基金面上项目(2013M540913)
　　通讯作者：李建荣,Tel：010-64056575,E-mail：jrongliem@ sina.com
　　药典》(一部),具有清热解毒、凉血消肿功效,用于治疗咽喉肿痛、肺热咳血、跌打肿伤[1]。在筋骨草的有效成分中,乙酰哈巴苷和哈巴苷的抗肿瘤活性最强[2],且在所含的环烯醚萜类成分中,乙酰哈巴苷的含量最高,哈巴苷次之。药典采用高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)测定乙酰哈巴苷含量对筋骨草药材进行质量控制[1]。也有报道采用HPLC-UV同时测定筋骨草药材中乙酰哈巴苷和哈巴苷含量[3]。乙酰哈巴苷的最大吸收波长为197 nm,哈巴苷为202 nm,同属于紫外末端吸收,在此波长范围内波长的微小变化会严重影响检测结果；同时流动相在该波长范围进行梯度洗脱时会产生基线漂移,导致峰面积积分准确性较差。本试验建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)同时测定筋骨草药材中乙酰哈巴苷和哈巴苷含量的方法,进一步优化筋骨草药材的质量控制。
　　1仪器与试药
　　安捷伦1200高效液相色谱仪(含柱温箱、自动进样器、四元梯度泵),Alltech ELSD2000ES蒸发光散射检测器,超声波清洗器(KQ-250DB,昆山市超声仪器有限公司)。
　　乙酰哈巴苷对照品(纯度＞99.9%,批号111925- 201001)、哈巴苷对照品(纯度＞99.9%,批号111729- 200603)购自中国食品药品检定研究院。筋骨草药材购于福建、湖北、河南等地,康辰医药股份有限公司提供,经康辰医药股份有限公司质量部孟令增鉴定为唇形科植物筋骨草Ajuga decumbens Thunb.的干燥全草。甲醇和乙腈均为色谱纯,购自美国Fisher公司。水为纯净水,购自杭州娃哈哈股份有限公司。
　　2方法
　　2.1色谱条件与系统适用性试验
　　Dikma C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相A为水、B为乙腈,梯度洗脱(0～6 min,5%B；6～11 min, 5%～15%B；11～17 min,15%B)；流速1 mL/min；柱温30 ℃。蒸发光散射检测器漂移管温度103 ℃,以经过滤干燥后的压缩空气为雾化气,气体流速1.6 L/min。在上述条件下,哈巴苷保留时间为5.8 min,乙酰哈巴苷保留时间为13.6 min,色谱图见图1。

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