裸花紫珠药材的指纹图谱研究

　　【摘 要】建立海南裸花紫珠HPLC指纹图谱，为其真伪鉴别和质量控制提供依据。方法： HPLC色谱条件： Thermo Acclaim TM 120 C18 5μm 120A（250 mm×4.60mm）色谱柱，以乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温：35℃，检测波长332nm，进样量：10μl。结果：以16批裸花紫珠样品的11个峰为共有峰评价指标，建立裸花紫珠的HPLC指纹图谱测定方法，相似度较好。结论：该方法可用于该药材的鉴别及质量控制。
　　【关键词】 裸花紫珠；指纹图谱
　　【Abstract】Objective：To establish HPLC fingerprint method for the quality evaluation and discrimination of Callicarpa nudiflora. Methods ： The chromatographic fingerprint of 16 samples was determined by injecting 10 μl of the sample solution each time om a reversed phase Thermo Acclaim TM 120 C18 column with the gradient elution solvent system composed of 0.1% Formic acid solution and acetonitrile . The flow rate was 1.0 ml/min ，the column temperature was 35 ℃ and the detection wavelength was set at 332nm.Results： The HPLC fingerprint of Callicarpa nudiflora was set up， which included 11 common peaks，and the similarities of 16 samples were well . Conclusion： The method which can be used for discrimination and the quality control of Callicarpa nudiflora .
　　【Key Words】Callicarpa nudiflora； HPLC fingerprint
　　裸花紫珠為马鞭草科植物裸花紫珠Callicarpa nudiflora Hook.et Arn.的干燥叶和带叶嫩枝，别名为赶风柴、节节红、大斑鸠米、贼仔叶。全年均可采收，为海南省常用的中草药，有止血止痛、散瘀消肿、祛风祛湿的功能，可治创伤出血、呕血、咳血、消化道出血、把牙出血、跌打损伤、风湿痹痛等症。《中药大辞典》认为该种是《岭南采药录》所载的赶风柴，《中国药典》1977年版一部以裸花紫珠为名收载，以后各版药典均未收载。[1]《中国药典》2015年版一部收载了以裸花紫珠为原料的裸花紫珠片及裸花紫珠胶囊。裸花紫珠属马鞭草科紫珠属，紫珠属植物要用较多，其中《中国药典》2015年版一部收载了该属植物紫珠叶、广东紫珠、大叶紫珠，裸花紫珠该品种从名称、来源和应用上存在混乱的现象。[2]为了更好地鉴别和控制裸花紫珠的质量、保障其制剂质量可控，本试验采用HPLC法，建立裸花紫珠的指纹图谱[3]。
　　1 材料和仪器
　　1.1试药
　　甲醇（色谱纯 TEDIA公司），甲醇（分析纯 广州牌化学试剂厂），乙腈（色谱纯 TEDIA公司），磷酸（色谱纯 TEDIA公司），超纯水（Synergy? UV制备）。
　　咖啡酸（购自购自中国药品生物制品检定所，批号110885-200102），连翘酯苷B（购自购自中国药品生物制品检定所，批号111811-201102），毛蕊花糖苷（购自成都克洛马生物科技有限公司，批号20140404），木犀草苷（购自中国药品生物制品检定所，批号111752-201609），异毛蕊花糖苷（购自成都克洛马生物科技有限公司，批号20140404）
　　样品裸花紫珠及批次详见表1 裸花紫珠样品及批号
　　1.2仪器
　　高效液相色谱仪：Ultimate 3000 analysis高效液相色谱仪，Ultimate 3000 analytical高效液相色谱仪，Waters E2695高效液相色谱仪；超纯水器：Synergy? UV；超声波清洗器：上海科导超声仪器有限公司，SK7200型。
　　2 方法与结果
　　2.1色谱条件
　　流动相：乙腈-0.1%甲酸磷酸梯度洗脱（详见表2流动相梯度）；流速：1ml/min；柱温：35℃；检测波长：332nm。进样量：10?l。
　　2.2标准溶液的制备
　　精密称取咖啡酸标准品、连翘酯苷B、木犀草苷标准品、毛蕊花糖苷标准品、异毛蕊花糖苷标准品，分别于用70%甲醇溶解为标准液。
　　2.3供试品溶液的制备
　　将裸花紫珠药材粉碎，精密称取粉末约0.5g，置于锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，回流提取1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　2.4指纹图谱共有峰的标定
　　根据不同批次的裸花紫珠供试品HPLC色谱图，共确定共有峰11个，其中1号为咖啡酸（9.1min），5号为连翘酯苷B（21.2min），7号为木犀草苷（26.5min），8号为毛蕊花糖苷（30.3min），9号为异毛蕊花糖苷（42.8min）。HPLC指纹图谱共有峰标定见图1～6。
　　2.5指纹图谱的相似度评价
　　取16批裸花紫珠药材按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，进行测定，测得指纹图谱导入“中药指纹图谱相似度评价系统”（2012.130723版本），生成对照指纹图谱。不同批次裸花紫珠指纹图谱相似度见表3。从其相似度可以看出不同批次样品该11个成分表现高度相似。
　　3 讨论
　　本文采用HPLC梯度洗脱的方法对了16批不同批次的裸花紫珠药材进行了指纹图谱研究会，建立裸花紫珠HPLC指纹图谱，并确定了其中的5个共有峰分别为咖啡酸、连翘酯苷B、木犀草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷。裸花紫珠中的成分主要有黄酮类、萜类、挥发油和酚类等，本文共有峰含酚类及黄酮类成分，具有较好的代表性。
　　参考文献
　　[1]海南省食品药品监督管理局.海南省中药材标准[s].海口：南海出版社，2011：147～154.
　　[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[s].一部.北京：中国医药科技出版社.
　　[3]马思瑶，盛琳，关薇薇等.[J]海南裸花紫珠高效液相色谱法指纹图谱研究.中药材.2014.37（3）：404～408.
　　作者简介：唐艳丽（1983），女（汉族），学士学位海南省药品检验所从事中药检验研究工作

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