多种药材与制剂中大黄酚与大黄素含量测定改进方法

　　[摘 要]目的：改进大黄酚与大黄素的测定方法。方法：通过甲醇提取与酸水解同步进行，用高效液相色谱法简便、快捷、准确地测定了多种药材与制剂中大黄酚与大黄素含量。色谱条件为：sihmadzuvP一ODS C18l：（150mmx4.6mm，5μm）为色谱柱，甲醇一0.1%磷酸（85：15）为流动相，流速：1.0mL·min-1，检测波长为254nm。结果：通过方法学考察，大黄酚的进样量在0.022一0.32μg（r=0.9999），大黄素的进样量在0.015一0.22μg（r=0.9999）范围内，呈良好的线性关系。大黄酚与大黄素的平均回收率（n=3）分别为96.10%一101.7%和96.75%一100.9%。结论：改进方法检测效率高，检测成本低，环境污染轻。
　　[关键词]药材；制剂；大黄酚；大黄素；改建方法
　　中图分类号：U879 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0356-01
　　传统大黄酚与大黄素含量测定所选用的方法比较烦琐，也浪费时间，同时还存在着比较大的误差，因此需要对这两种物质含量测量进行改进，可以将甲醇、酸水等有机融合起来，不再进行氯仿萃取、蒸干的环节，此种方法不仅简单，花费的时间也比较少，同时还不会受到温度等因素的干扰。大量的实践证明，应用改进后的方法来对上述两种物质进行含量测量，效果比较好，同时还能够减少环境污染，为操作人员的生命健康也提供了一定的保证。
　　一、材料、仪器与试药
　　痛风舒片（批号：050401，0.49·片-1）、碧云砂乙肝胶囊（批号：050711，0.59·粒-1）由承德燕峰药业股份有限公司提供；三黄片（批号：0505201，0.259·片-1）为河北省药品检验所留样。药用大黄（批号：120984一200301）、虎杖（批号：120980-200002）、决明子（批号：121011一20以03）药材、大黄酚对照品（批号：96一200107）、大黄素对照药品（批号：0756-200211）购自中国药品生物制品检定所。日本岛津LC一IOADvp泵；SPD一Ml0ADvp二极管阵列检测器；CLASS一VP/LC色谱工作站；美国77251手动进样器。美国Waters2695分离单元；Waters2487双波长紫外检测器；Empower色一潜工作站。流动相所用的试剂为色谱纯，其他试剂、试药均为分析纯。
　　二、实验过程
　　1、溶液制备
　　1.1 制备对照品溶液
　　研究者要分别精确的称取大黄酚与大黄素，充当对照品，再分别的添加一定量的甲醇，制成为1ml中含有0.4mg的溶液，而后称取溶液添加90%甲醇，而后分别制成8μg/ml的大黄酚溶液、4μg/ml的大黄素溶液。
　　1.2 制备供试品溶液
　　研究者选择专门工具进行准备称取，放入到塞三角瓶中，而后再添加甲醇与盐酸，两者之间的比例为10：1，溶液整体整体为25ml，精确称取重量，将溶液放入到80℃的水浴中，待到半个小时后，再放冷，如果瓶壁中存在黏附现象，采用超声去除，再使用甲醇补足，以此保证最终重量不会受到影响，而后摇晃均匀，过滤，再吸收2ml滤液，将其放入到10ml量瓶中，再添加氢氧化钠大约2%，体积为1ml，再添加甲醇直到制定刻度，而后摇晃均匀，过滤，再取滤液就获得了供试品溶液。
　　2、线性范围
　　研究者选择精密仪器分别称取对照品，之后再分别添加90%甲醇，制成10.8μg/ml的大黄酚与7.53μg/ml的混合溶液。将封面积看作是纵坐标，而将进样量看作是横坐标，以此绘制成为一个标准曲线。实践发现，大黄酚进样量保持在0.022-0.32μg之间，并且与峰面积保持着比较好的线性关系，大黄素的进样量在0.015一0.22μg，与峰面积呈良好的线性关系。
　　3、稳定性试验
　　取各供试品溶液及“精密度试验”项下的对照品溶液，分别于0，2，6，12，24h进样测定，考察了24h内的稳定性。结果各供试品溶液中大黄酚峰面积的RSD为0.41%一0.57%，大黄素峰面积的RSD为0.24%一0.99%；对照品溶液中大黄酚峰面积的RSD为0.26%，大黄素峰面积的RSD为0.40%。说明供试品溶液与对照品溶液在24h内稳定。
　　4、重复性试验
　　各样品取样量的80%，100%，120%，同一批样品取9份，按上述方法制备溶液，按“2”项下色谱条件测定。各样品9次测定的结果，见表1。说明方法重复性良好。
　　5、加样回收率实验
　　按上述方法各样品取样量的1/2，称取已知含量的同一批样品9份，平均分为3组，每组按此取样量的样品中大黄酚及大黄素含有量的60%，100%，140%添加对照品，照上述方法制备溶液测定，计算回收率。
　　6、样品的测定
　　采用上述的样品处理方法，制备各供试品溶液，按色谱条件进样，采用外标法，计算各样品含量，具体结果见表2。
　　三、讨论
　　1、研究者选择应用二极管阵列检测器分别为大黄酚与大黄素进行光谱扫描，最终发现大黄酚共出现了3个吸收峰，分别为222nm，灵敏性最佳、254nm灵敏性次之、288nm子佛灵敏性最差等；大黄素共出现了4个吸收峰，分别为220nm，灵敏性最佳；288nm灵敏性次之；265nm灵敏性稍差；252nm灵敏性最差，另外大黄素的对照品以及样品波峰非常相似，由于我国药典记录的波长也相同，基于此，研究者最终选择254nm充当测定波长。
　　2、大黄酚与大黄素含量测定传统方法如下：使用酸性比较强的甲醇水解，需要注意的是水解温度要低于算酸水温度。此种方法因为酚类很少被破坏，再加之还需要萃取与蒸干，因此从理论上讲，此种方法测量更加符合现实。为了能够让溶液酸度控制在一定范围内，研究者将用于实验试品溶液添加了一定量的碱液，PH值保持在3-4之间，使得大黄酚与大黄素始终都处于比较好的分子状态，经过经验色谱峰分离呈现出良好的态势，而且峰形也比较对称。
　　3、据统计我国223家厂家允许生产三黄片，而需要测定大黄等元素含量的厂家则达到了上千家，若这些厂家都能够应用本文介绍的方法，不仅能够减少有机试剂的使用，还能够降低环境污染，对操作人员的身心健康也有一定的保证。
　　参考文献
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