不同规格鹿茸商品药材中氨基酸含量分析

　　[摘要] 目的：测定不同规格鹿茸商品药材中氨基酸的含量，从氨基酸含量方面对不同规格鹿茸进行质量控制。
　　方法：采用柱前衍生化法，利用氨基酸自动分析仪对样品中18种氨基酸含量进行测定。
　　结果：18种氨基酸线性方程r均大于0.997，平均回收率均在99.1%～108.1%，RSD均小于2.0%；39个不同品种规格鹿茸药材中均含有17种氨基酸及7种人体必需氨基酸，腊片氨基酸含量较高，头茬茸较二茬茸氨基酸含量高，与传统分类相一致。
　　结论：该方法可用于鹿茸药材氨基酸含量测定及质量控制。
　　[关键词] 鹿茸；氨基酸；含量测定
　　鹿茸Cornu Cervi Pantotrichum为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿C. elaphus Linnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，具有壮肾阳，益精血，强筋骨，调冲任，托疮毒的功效^[1]。由于鹿茸的商品药材可按采收时间（头茬茸、二茬茸）、生长年限（二杠、单门、三岔、莲花、四岔等）、药用部位（主枝、侧枝）、饮片切制的部位（腊片、粉片、纱片和骨片）、加工过程（排血、不排血）等不同方面分为若干等^[2]，市场上鹿茸的规格多达40余种。在鹿茸所含的各类成分中氨基酸是其主要且含量较高的成分，近年来对于鹿茸不同规格的药材氨基酸含量的测定也有所报道^[3-6]，但都是针对规格的某一个方面，为有效控制鹿茸不同规格药材的质量，本实验收集了39个不同规格的鹿茸药材，利用氨基酸自动分析仪，采用柱前衍生化法对其中的18种氨基酸含量进行了测定，以期从氨基酸含量方面对鹿茸商品药材的规格划分及质量控制提供理论依据。
　　1 材料
　　1.1 仪器
　　P230Ⅱ氨基酸自动分析仪，UV230Ⅱ紫外-可见检测器，P230Ⅱ高压恒流泵，QT-330色谱柱温箱，EC2006色谱数据处理工作站（大连依利特分析仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）；AR2140电子分析天平（METTLE公司）；101型电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂）。
　　1.2 试剂
　　Elite-AAK氨基酸对照品[天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、丝氨酸（Ser）精氨酸（Arg）、甘氨酸（Gly）、苏氨酸（Thr）、脯氨酸（Pro）、丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、半胱氨酸（Cys）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）色氨酸（Trp）苯丙氨酸（Phe）、组氨酸（His）、赖氨酸（Lys）每种5 mg，酪氨酸（Tyr）2.5 mg]；氨基酸衍生化试剂（2，4-二硝基氟苯）；衍生缓冲溶液固体组分A、衍生缓冲溶液固体组分B、平衡缓冲溶液固体组分A、平衡缓冲溶液固体组分B、流动相固体组分B（以上试剂均由大连依利特分析仪器有限公司提供）；乙腈为色谱纯（Oceanpak Alexative Chemical公司） ；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
　　1.3 药材
　　39个不同规格的鹿茸商品药材分别购于各药材市场，经辽宁中医药大学李峰教授鉴定分别为鹿科动物梅花鹿C. nippon或马鹿C. elaphus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，见表1。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件
　　色谱柱为依利特公司氨基酸分析专用ODS柱及保护柱；流动相A为乙腈-水（1∶1），流动相B相按依利特公司试剂说明配制，二元梯度洗脱；总流速 1.2 mL·min^-1；柱温 27 ℃；检测波长 360 nm；进样量 10 μL；梯度洗脱程序见表2。
　　2.2 溶液配制
　　衍生缓冲溶液、平衡缓冲溶液按试剂说明配置。
　　2.3 对照品溶液的制备
　　将Elite-AAK氨基酸对照品用衍生缓冲溶液定容至250 mL量瓶中，4 ℃冷藏，备用。
　　2.4 供试品溶液的制备
　　分别取表1中样品粉末约0.04 g（过40目筛），精密称定，置于10 mL具塞试管中，加入5 mL 6 mol·L^-1盐酸，放入烘箱中110 ℃水解24 h。将水解后样品多次用水洗涤转入蒸发皿，80 ℃水浴蒸干。用衍生缓冲溶液多次洗涤蒸发皿，洗液转入25 mL量瓶中，并用衍生缓冲溶液定容。过滤，备用。
　　2.5 对照溶液品和供试品溶液的衍生化
　　精密量取 2.4项下供试品溶液2 mL和3 mL衍生缓冲溶液置25 mL棕色量瓶中，或取对照品溶液5 mL置25 mL棕色量瓶中，分别加入2.5 mL衍生化试剂，混匀，用封口膜封口。放入60 ℃水浴中，暗处反应60 min。反应完毕，取出冷却至室温，用平衡缓冲溶液稀释至刻度，静置15 min，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
　　2.6 方法学考察
　　2.6.1 线性关系考察 分别精密吸取 2.5项下对照品溶液5，8，10，15，20 μL注入氨基酸自动分析仪，按 2.1项下色谱条件测定峰面积。以峰面积Y为纵坐标，进样量X为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，见表3。
　　2.6.2 精密度试验 取同一份样品供试液，按 2.5项下方法制备，重复进样5次，每次进样10 μL，分别测定峰面积，结果18种氨基酸峰面积RSD均小于2.4%。
　　2.6.3 重复性试验 精密称取同一供试样品5份，
　　每份0.04 g，按 2.4，2.5项下方法制备成供试品溶液，精密吸取10 μL，在上述色谱条件下进样测定峰面积并分别计算18种氨基酸含量，结果18种氨基酸含量的RSD均小于1.6%。

相关热词搜索：鹿茸 氨基酸 药材 含量 规格