不同产地黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的比较

　　摘要：通过高效液相色谱法（HPLC）测定不同产地黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量，以期为黄芪药材质量评定提供依据。采用Waters Symmetry C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm ），流动相为乙腈-水（81 ∶19），流速：1.0 mL/min，柱温：30 ℃，进样量10 μL，检测波长260 nm。结果表明：毛蕊异黄酮葡萄糖苷的浓度在0.145 6～0.698 7 mg/mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 7，平均加样回收率为100.35%，RSD为1.98%，所建方法快速、简便、重现性好。4个省份16个产地药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量差异较大，其中内蒙古自治区包头市所产黄芪中其含量最高。从各地平均值看，内蒙古自治区>山西省>甘肃省>黑龙江省，且内蒙古自治区与其他3个省份药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量差异显著。省内之间的差异显著性结果表明，内蒙自治区和山西省产地之间差异较大，甘肃省和黑龙江省产地之间差异较小。
　　关键词：黄芪；毛蕊异黄酮葡萄糖苷；HPLC
　　中图分类号： S567.01
　　文献标志码： A
　　文章编号：1002-1302（2016）04-0226-03
　　黄芪为著名滋补中药，是豆科植物蒙古黄芪[Astragalus membranaceus （Fisch.） Bge. var. mongholicus （Bge.） Hsiao]或膜荚黄芪[Astragalus membranaceus （Fisch.） Bge.]的干燥根。现代药理研究表明：黄芪具有敛疮生肌、延缓衰老、增强机体免疫等功能[1]。诸多研究证明，黄酮类作为黄芪中的主要成分之一，其抗炎、抗病毒、调节免疫等多方面的药理作用非常显著[2-6]。毛蕊异黄酮葡萄糖苷作为黄芪药材中黄酮类的主要成分，已被2010版《中国药典》作为黄芪药材的指标性成分[1]。
　　黄芪分布于华北、东北及西北地区。目前市场上的黄芪药材产地较广，品质差异较大[7-8]。本研究通过对黄芪4个主产省份山西省、内蒙自治区、黑龙江省、甘肃省16个不同产地药材中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行测定，并运用SSR法比较不同产地黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的差异大小，研究结果可为黄芪药材的品质评价提供基础和依据。
　　1 仪器、材料和试剂
　　1.1 仪器
　　Waters 2695高效液相色谱仪、2998 PDA检测器、RE-52AA 系列旋转蒸发器、KQ3200DE型数控超声波清洗器、SHZ-DIII循环水式多用真空泵、FZ102微型植物试样粉碎机、FA1004电子天平、DK-S24电热恒温水浴锅、GF-101型电热鼓风干燥箱。
　　1.2 材料
　　黄芪药材分别购于山西省、内蒙自治区、黑龙江省、甘肃省等当地药材市场，共4个省16个不同产地的黄芪，经运城学院滕红梅教授认定均为黄芪药材。将药材置于40 ℃电热鼓风干燥箱进行干燥，研成粉末过60目筛保存以备用。
　　1.3 试剂
　　毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：20141109）；水为二次重蒸水，甲醇和乙腈为色谱纯。
　　2 方法与结果
　　2.1 黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷测定方法的建立
　　2.1.1 色谱条件 Waters公司Symmetry C18 色谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相水-乙腈（81 ∶19）；柱温，30 ℃；流速，1.0 mL/min；检测波长，260 nm；进样量10 μL。色谱图见图1。
　　2.1.2 对照品溶液的制备 精确称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品6.950 mg置10 mL容量瓶中。加甲醇溶解、摇匀，即得。
　　2.1.3 供试品溶液的制备 将精确称取的2 g黄芪粉末置于具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，于80 ℃水浴锅中加热回流4 h，待放凉后再摇匀过滤，滤渣用10 mL甲醇洗涤2～3次，之后将原液与洗涤液合并，减压回收溶剂后将残渣加甲醇溶解，再转移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀后用微孔滤膜过滤，即得到供试品溶液。
　　2.1.4 标准曲线的绘制 吸取毛蕊异黄酮苷对照品溶液 1 000 μL，加入滤过的甲醇2 000 μL，再用微孔滤膜滤过，置于样品瓶中。按“2.1.1”节的色谱条件分别进样2、4、6、8、10 μL，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果发现，在浓度范围内，标准品浓度与其峰面积呈现良好的线性关系。线性回归方程为y=3.80×107 x+1.06×106，r=0.999 7，线性范围0.145 6～0.698 7 mg/mL。
　　2.1.5 精密度试验 精确吸取山西省浑源市同一供试品溶液重复进样5次，测得毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD为0.46%。
　　2.1.6 稳定性试验 取山西省浑源市同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、16、24 h检测，显示毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD为1.20%。
　　2.1.7 重现性试验 准确称取产自山西省浑源市的药材粉末平行样品5份，按“2.1.3”节的制备方法操作，显示毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD为1.67%，平均含量为 0.234 mg/g，表明本法重现性良好。
　　2.1.8 回收率试验 称取含量已知的同一批样品5份，每份约0.5 g，依次加入浓度为0.133 mg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液4 mL。按“2.1.3”节方法配制样品溶液，并于“2.1.1”节色谱条件下进样，根据测量结果计算出各对照品的平均加样回收率。计算所得回收率为100.35%，RSD为 1.98%。
　　2.1.9 样品含量测定 精确量取样品溶液按照“2.1.1”节的色谱条件测定其峰面积，根据“2.1.2”节得出的回归方程计算不同产地黄芪毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量。

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