活性三七药材质量特征研究

　　摘要 [目的]将活性三七与普通干燥三七不同部位进行质量特征对比研究，为建立活性三七药材质量标准研究提供依据。[方法]通过显微结构、红外光谱、重金属残留、各皂苷含量、有效成分溶出率及醇溶浸出物含量等分析测试手段，同时对活性三七与普通干燥三七进行定性鉴别与定量研究，分析其有效成分和特征结构的变化。[结果]显微结构有差异；红外光谱特征区相同，指纹区有差异；活性三七重金属残留低于普通干燥三七；活性三七各皂苷含量、有效成分溶出量及醇溶浸出物均高于普通干燥三七。[结论]三七药材经过冷冻干燥处理后，具有明显的特征结构，质量优于普通干燥三七。
　　关键词 三七；显微结构；红外光谱；含量测定；溶出度
　　中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）35-12457-04
　　三七（Panax notoginseng（Burk.）F .H .Chen）作为我国特有的名贵中药材之一，也是我国最早的药食同源植物之一，具有活血化瘀、改善心肌微循环等药理作用，用于预防和治疗冠心病、心绞痛等疾病[1]。目前对三七的加工方式多采用日晒或烘烤成干品三七，得到的干品三七比鲜三七皂苷含量平均降低30%左右[2]。近年来采用低温冷冻干燥技术，在特定的温度条件下（-50～-30 ℃） 真空状态下获得的一种三七加工制品——活性三七，能够较好地保存三七中的有效成分[3]。此外，不同于普通干燥三七，活性三七质地疏松、质量较轻、携带方便、便于保存，能够直接咀嚼服用。因此，活性三七系列饮片的开发和上市，对中药饮片的现代化进程具有良好的促进作用[4-5]。对活性三七进行全方位的质量控制是保证临床用药安全、有效的重要手段。而针对活性三七与普通干燥三七质量研究对比的报道尚属空白。笔者对同一批次的鲜三七进行普通干燥和冷冻干燥，通过2种加工方式得到普通干燥三七和活性三七，对2种药材的剪口、根头及须根进行了系统全面的对比研究，包括显微结构和红外光谱鉴别以及重金属残留、浸出物及皂苷含量测定，并在此基础上，进一步对2种药材的有效成分溶出速率进行了考察，为活性三七饮片质量标准的建立奠定研究基础。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 仪器。OLYMPUBH-2-UMA显微镜；GZX-9070MBE型电热鼓风干燥箱；BRUKER-VECTOR22型傅里叶变换红外光谱仪；LC-20A高效液相色谱仪；Grace VisionHT C18色谱柱（250 mm×4.6 mm ，5 μm）；7AS-990原子吸收分光光度计；Savant AAZ原子吸收分光光度仪；ZRD-8 溶出度测试仪；FLB-200型万能高速粉碎机；优普系列超纯水器UPT-I-20T；CP114电子天平。
　　1.1.2 试验试剂。对照品人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1由中科院昆明植物研究所陈纪军老师提供，人参皂苷Re（批号MUST-12110602）购自北京北纳创联生物技术研究院，三七皂苷R1（批号111686-201002）购自中国药品生物制品检定所；标准品汞（GBW08617 9041）、铅（GBW08619 8061）、镉（GBW08612 7063）、铜（GSB G62024-90 （2902））、砷（GSB G 62028-90（3302）购于中国计量科学研究院；乙腈（美国Sigma公司）；甲醇（美国Sigma公司）；超纯水，其他所有试剂均为国产分析纯。
　　1.1.3 药材。该试验所用三七药材来源于云南好农夫三七产业有限公司。活性三七药材和普通干燥三七药材均为同一批次鲜三七经不同加工处理方式而得到。
　　1.2 方法
　　1.2.1 显微鉴别。石蜡切片取根，FAA固定液（50%酒精90 ml+冰醋酸5 ml+福尔马林5 ml）固定，酒精系列（50%～100%）梯度脱水，石蜡包埋，切片厚 7 ～1 0 μm，番红—固绿染色，中性树脂封固。在Olympus研究用显微镜下观察并照相。
　　1.2.2 红外特征光谱[6-7]。
　　1.2.2.1 红外光谱仪测试条件。采用BRUKER-VECTOR22 FT-IR 光谱仪，光源为MIR光源，RT-DLaTGS检测器，测量范围为4 000～400 cm-1，光谱分辨率为4 cm-1，扫描速度为10 kHz，信号扫描累加16次，在此设置下进行红外扫描。
　　1.2.2.2 样品制备。取不同部位的活性三七及普通干燥三七样品各1.0～1.5 mg与KBr 200～300 mg于玛瑙研钵中研磨成混合均匀的粉末，用小药匙转入制片模具中于油压机10 t压力下保持2 min，撤去压力后取处制成的供试片，目视检测，片子呈透明状，取出样品片装入样品架。
　　1.2.3 重金属残留。取不同部位的活性三七及普通干燥三七样品，参照中国药典附录IX B[8] 测定，铅、镉的测定采用Savant AAZ原子吸收分光光度仪，砷、汞、铜的测定采用7AS-990原子吸收分光光度计。
　　1.2.4 皂苷含量测定。
　　1.2.4.1 色谱条件。Grace VisionHT C18色谱柱（250 mm×4.6 mm ，5 μm）；流动相为水（A）-乙腈（B）梯度洗脱，0.01～12 min（19%B）、12～60 min（81%～64%A，19%～36%B）、60～67 min（64%～0%A，36%～100%B）；体积流量1 ml/min；柱温为30 ℃；检测波长为203 nm。
　　1.2.4.2 对照品溶液的制备。精密称取三七皂苷R1以及人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd标准品，加甲醇溶液配置成含R1、Rg1、Re、Rb1、Rd分别为1.07、1.12、1.10、0.96和1.14 mg/ml的混合液作为对照品。
　　1.2.4.3 供试品溶液制备[8]。取供试品约0.6 g，精密称定，加50 ml甲醇浸泡，静置过夜，75 ℃水浴2 h，保持微沸，冷却，再称定质量，用甲醇补足失去的质量，离心，取上清液，经0.45 μm滤芯过滤，作为供试品溶液。

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