苦碟子药材及其注射液中化学成分的HPLC—ESI—MSn分析

　　[摘要] 应用 HPLC-ESI-MSn建立1种苦碟子药材及其注射液的快速定性分析方法。通过与对照品保留时间、多级质谱信息对照，快速定性分析苦碟子药材及其注射液中的化学成分。共鉴定出33个化合物，核苷类3个、有机酸类16个、黄酮类7个以及倍半萜内酯类7个，其中通过对照品比对准确鉴定了12个化合物，11个化合物为首次在苦碟子中发现。结合已知化合物的裂解规律和未知化合物的多级质谱信息，对5个同分异构体的化合物结构进行了预测。所建立的苦碟子 HPLC-ESI-MSn定性分析方法简单、快速、高效，可以为苦碟子的质量控制和评价提供有效依据。
　　[关键词] 苦碟子；HPLC-ESI-MSn；裂解规律；核苷；有机酸；黄酮；倍半萜内酯
　　[收稿日期] 2013-03-29
　　[基金项目] 国家重点基础研究发展计划（973）项目（2012CB518406）
　　[通信作者] *乔延江，教授，Tel：（010）84738660，E-mail：yjqiao@263.net
　　[作者简介] 刘颖，助理研究员，Tel：（010）64286052，E-mail：liuyingtcm@gmail.com 苦碟子又名满天星，学名抱茎苦荬菜 Ixeris sonchifolia （Bge.）Hance，为菊科苦荬菜属植物。苦碟子注射液为抱茎苦荬菜提取物加工制备而成，具有活血止痛，清热祛瘀的功效，临床主要用于冠心病、心绞痛、急性脑梗死等。苦碟子注射液虽为单味药制剂，但其成分也较为复杂。已有研究显示，苦碟子中主要有核苷、有机酸、黄酮、倍半萜内酯和木脂素等类化合物^[1-4]。如何较全面地快速阐明苦碟子的化学物质基础？常规的提取分离技术成本大，周期长，对环境污染较大，因此本研究采用 HPLC-ESI-MSn对苦碟子药材及其注射液中化学成分进行了快速定性分析，以期为苦碟子及其注射液的质量控制与安全性评价提供依据。
　　1 材料
　　Agilent 1100 型液相色谱仪，配有二元梯度泵、在线真空脱气装置、自动进样器、色谱柱恒温箱、光电二极管阵列检测器及 Chem Station 工作站；电喷雾离子源（ESI）-MSD Trap XCT plus 离子阱质谱仪（美国 Agilent 科技有限公司）；KQ-250DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Millipore Synergy UV型超纯水机（美国 Millipore 公司）；R200D 型电子分析天平（德国 Sartorius 公司）。
　　尿苷（批号120809）、鸟苷（批号120731）购买于上海融禾医药科技有限公司；腺苷（批号110879-200202）、咖啡酸（批号110885-200102）、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（批号11720-201106）、木犀草素（批号111520-200504），购于中国食品药品检定研究院；3-咖啡酰奎宁酸、5-咖啡酰奎宁酸、4-咖啡酰奎宁酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸与4，5-二咖啡酰奎宁酸，购于成都普瑞法科技开发有限公司；菊苣酸与芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，购于成都德天生物科技有限公司；纯度均大于98%。吉林通化华夏药业有限责任公司生产的苦碟子注射液（批号120414）凭处方购于北京中医药大学东方医院。苦碟子药材为吉林通化华夏药业有限责任公司提供，经北京中医药大学卢建秋研究员鉴定为菊科苦荬菜属植物抱茎苦荬菜 I. sonchifolia 的干燥地上部分；甲醇、乙腈（色谱纯，德国 Merck 公司），乙酸（色谱纯，美国 Tedia 公司），所用水为超纯水。
　　2 方法与结果
　　2.1 溶液制备
　　2.1.1 对照品溶液的准备 分别取腺苷、3-咖啡酰奎宁酸、5-咖啡酰奎宁酸、4-咖啡酰奎宁酸、咖啡酸、菊苣酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素标准品适量，加甲醇制成适宜浓度的储备液，后适当稀释制成混合对照溶液，即得。
　　2.1.2 供试品溶液的制备 取苦碟子药材粉末适量，加甲醇超声提取30 min，静置，上清液经0.22 μm微孔滤膜过滤，即得。取吉林通化华夏（批号120414）生产苦碟子注射液2支，混合后经0.22 μm 微孔滤膜过滤，即得。
　　2.2 分析条件
　　2.2.1 色谱条件 Thermo BDS hypersil C₁₈色谱柱（4.6 mm × 250 mm， 5 μm），流速1.0 mL·min^-1，检测波长254 nm，柱温30 ℃，进样量5 μL，流动相为乙腈（A）-0.5%乙酸溶液（B），洗脱梯度为：0 min，2%A，15 min，8%A，30 min，18%A，45 min，21%A，55 min，28%A。
　　2.2.2 质谱条件 采用ESI源，负离子模式，雾化气压力0.24 MPa（N₂，>99.99%），干燥气流速（N₂，>99.99%）11.0 L·min^-1，干燥气温度350 ℃，毛细管电压3.5 kV，全扫描范围为 m/z 100～800，3 级碎片扫描，多级质谱的碰撞电压为1 V。
　　2.3 苦碟子药材及其注射液 HPLC-ESI-MSn分析结果
　　应用 HPLC-DAD-ESI-MSn整体分析苦碟子药材及其注射液各类成分：根据多级质谱的碎片信息，采取对照品对照和参考已有文献的方式，对苦碟子药材及其注射液中4大类成分共33种化合物进行了快速鉴定，并依据已知化合物的裂解规律推断了5个互为同分异构体的未知化合物。混合对照品、苦碟子药材和苦碟子注射液的 HPLC-DAD 图与总离子流图（TIC）分别见图1，2，各类成分的归属信息见表1，结构式见图3。

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