两种土荆皮习用药材提取物体外抗真菌活性研究

　　【摘要】 目的 研究市场两种习用土荆皮代用药材的体外抗真菌活性，为土荆皮的习用药材(水翁皮与余甘子皮)的药理应用提供依据。方法 采用药基琼脂稀释法，研究水翁皮与余甘子皮的提取物对11株浅表性皮肤癣菌的最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC)。结果 土荆皮的提取物对武汉须毛癣菌、武汉近平滑癣菌的MIC和MFC 3.13 μl/ml,对其余9株皮肤癣菌的MIC和MFC 6.25 μl/ml,水翁皮与余甘子皮的提取物对试验11株皮肤癣菌的MIC和MFC>50 μl/ml, 达克宁的MIC和MFC<0.78 μl/ml。结论 土荆皮的两种习用药材水翁皮与余甘子皮体外对11株皮肤癣菌未显示出抗真菌活性。?
　　【关键词】
　　土荆皮；水翁皮；余甘子皮；抗真菌活性；体外
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　　Study on antifungal activity of cortex pseudolarici?s alternative medicine in vitro
　　
　　GUI Shu-hua, FU Tao, WANG Jie,et al.
　　New Drug R&D Dept. in Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006,China
　　?
　　【Abstract】 Objective To study the antifungal activity of extracts from Bark of Cleistocalyx operculateand Phyllanthus emblica L. in vitro for their application of medicinal pharmacology. Methods The minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum concentration (MFC) of extracts from Bark of Cleistocalyx operculateand Phyllanthus emblica L. against 11 strains dermatophytes were determined by media dilution method. Results Apart from Trichonphyton mentagrophyton (Wuhan strain) and Candida parapsilosis (Wuhan strain) (MIC=3.13μl/ml), MIC of Cortex Pseudolarici extract against other strains were 6.25μl/ml, MFC value were similar to its MIC. All the strains were not susceptible to extracts from Bark of Cleistocalyx operculateand Phyllanthus emblica L, their MIC>50 μl/ml, miconazole nitrate?s MIC and MFC<0.78 μl/ml. Conclusion Bark of Cleistocalyx operculate and Phyllanthus emblica L. have no antifungal activity against 11 strains dermatophytes.?
　　【Key words】
　　Cortex Pseudolarici； Cleistocalyx operculate； Phyllanthus emblica L;Antifungal activity; In vitro
　　?
　　土荆皮来源于松科植物金钱松(Pseudolarix kaempferi Gord)的干燥根皮和近根树皮。最早见于清代赵学敏所著《本草纲目拾遗》, 性辛、温、有毒、止痒杀虫, 用于治疗癣症。经研究发现, 其含有二萜类、三萜类、三萜内酯及甾醇类等成份。现代药理实验表明其具有抗真菌、抗肿瘤、抗生育、使胆囊自截等作用［1］。?
　　金钱松为我国二级保护植物，资源难求，在临床上用药治疗有一定的困难，因此水翁皮与余甘子皮常作为土荆皮的替代品在临床上使用。但对于水翁皮和余甘子皮是否真正具有抗真菌活性尚缺乏实验研究报道。本课题拟对作为“土荆皮”入药的习用替代药材水翁皮与余甘子皮进行抗真菌活性筛选研究，为水翁皮与余甘子皮的临床应用提供依据。?
　　1 资料与方法?
　　1.1 仪器 Spx-150B生化培养箱(上海康华生化仪器厂)，EYELA型旋转蒸发仪，水浴锅，高压灭菌锅，蛇形冷凝管，打粉机，小研钵，一次性试管，三角烧瓶，蒸发皿，移液管 1、2、10 ml各若干。?
　　1.2 实验药物与试剂 沙氏琼脂培养基(批号200903023)；达克宁，购自广东市药检所，批号：20080301；药材1购于广州杏园春大药房，经广州中医药大学中药鉴定教研室吴文如讲师鉴定为桃金娘科植物水翁(Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr. Et Perry)的树皮水翁皮；药材2购于广州致信药业，经鉴定为桃金娘科植物水翁(Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr. Et Perry)的树皮水翁皮药材；药材3购于云南菊花村药材市场，经鉴定为大戟科叶下珠属植物余甘子(Phyllanthus emblica L.)的树皮余甘子皮。药材4采于四川五块石药材市场，经鉴定为松科植物金钱松(Pseudolarix kaempferi Gord)的干燥树皮。?
　　1.3 实验菌种 11株菌种，由上海华山医院皮肤科真菌室以及武汉同济医科大学医学真菌室提供。上海株：断发毛癣菌、絮状表皮癣菌、羊毛状小孢子菌，武汉株：须毛癣菌、猴毛毛癣菌、黑青毛癣菌、白色念珠菌32035、白色念珠菌38253、犬状小孢子菌、近平滑念珠菌、无色红毛毛癣菌。?
　　2 方法与结果?
　　2.1 实验样品制备 分别取土荆皮、水翁皮和余甘子皮药材粗粉各约50 g，分别加70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量体积的乙醇，第一次加入8倍量体积的乙醇，1.5 h/次。过滤，洗涤药渣后，合并提取液，用旋转蒸发仪回收至无醇味，水液回收至少量，转移至蒸发皿，水浴蒸干，并置于60℃烘箱中烘干得浸膏。用打粉机将浸膏粉碎，过100目筛，得实验粉末。?
　　2.2 含药培养基的制备(试管药基法)
　　称取沙氏琼脂培养基39 g，加入600 ml蒸馏水使充分溶解后，置高压灭菌锅中115℃灭菌15 min，备用。称取样品各2.2 g，加入44 ml灭菌培养液，即得5%浓度的样品，分装2 ml至试管并置斜面。依次稀释至浓度2.5%, 1.25%，0.625%, 0.313%l, 0.152%, 0.076%浓度,同法置斜面。?
　　2.3 菌液制备 将沙氏培养基斜面上25℃孵育2周的菌种，用接种钩挑取适量菌落放入消毒乳钵中，加入1 ml生理盐水，研磨成真菌混悬液，再在血细胞计数板上用生理盐水调整菌液浓度到1×105~106/ml。?

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