低次烟叶蛋白质—多酚复合物的成分及抗氧化性分析

　　摘要：采用碱溶酸沉法从烤烟低次烟叶中提取蛋白质-多酚复合物，检测其中蛋白质含量为350 mg/g，多酚成分包括绿原酸、莨菪葶、芸香苷，其含量分别为2.1、0.5、2.9 mg/g。对蛋白质-多酚复合物进行抗氧化性检测。结果表明，在一定范围内，DPPH·自由基与OH·自由基的清除率随复合物浓度的增加而升高；对蛋白质-多酚复合物中蛋白质进行酶解，酶解产物的抗氧化性测试结果表明，随着酶解时间的延长，复合物对DPPH·自由基与OH·自由基的清除活性均呈下降趋势，说明蛋白质与多酚结合状态下才能保持蛋白质-多酚复合物的抗氧化性，而且其抗氧化性可能主要来源于复合物中的多酚。
　　关键词：低次烟叶；蛋白质-多酚复合物；酶解；抗氧化性
　　中图分类号：S572 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）03-0531-04
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.03.035
　　Analysis of Composition and Antioxidant Activity of Protein-polyphenol Complex from Discarded Tobacco Leaves
　　XU Chun-ping1，RAN Pan-pan1，ZENG Ying1，TAN Lan-lan2，SHENTU Hong-qian2，MA Kuo-yan3，DAI Ya3
　　（1.College of Food and Biological Engineering， Zhengzhou University of Light Industry， Zhengzhou 450002，China；
　　2.Technical Center of China Tobacco Chuanyu Industrial Co. Ltd.， Chengdu 610066，China；
　　3.Technical Center of China Tobacco Chongqing Industrial Co. Ltd.， Chongqing 400060，China）
　　Abstract： The protein-polyphenol complex was extracted from discarded tobacco leaves by alkali-solution and acid-isolation method. The protein content was detected as 350 mg/g and polyphenol components including chlorogenic acid， scopoletin and rutin， and their contents were 2.1 mg/g， 0.5 mg/g， and 2.9 mg/g， respectively. The antioxidant tests of protein-polyphenol complex showed that in a certain range， the scavenging rate of DPPH· radical and OH· radical increased with the increase of the concentration. The scavenging activity of DPPH· radical and OH· radical was decreased with the time of enzymatic hydrolysis. The results indicated that the antioxidant activity of protein-polyphenol can maintain with the binding stage of protein and polyphenol， and the main source of antioxidant activity could be from polyphenols.
　　Key words： discarded tobacco； protein polyphenol complex； enzymatic hydrolysis； antioxidant activity
　　中國是烟草种植大国，也是卷烟生产大国，同时每年产生的低次烟叶也数量庞大，有效利用这些废料既可以保护环境，减轻环境负担，也能创造更高的经济价值。烟叶蛋白质是一种优质的蛋白质资源，作为食用蛋白质来说它比鸡蛋、乳酪和牛奶更适合人体吸收利用，具有较高的营养价值和药用价值[1]。Kung等[2]、Lowe[3]对烟叶FI蛋白质进行了提纯。赵谋明等[4]使用碱溶酸沉法工艺对烟叶蛋白质进行提取。研究表明，提取出的蛋白质是一种蛋白质多酚复合物[5]，其中多酚成分对其生物活性有较大影响。林晓婕等[5]从烟叶中提取出色素蛋白质复合物，表明其中多酚物质对其抗紫外活性起主要作用。王洁[6]研究表明，蛋白质与多酚以非共价形式结合。本试验对提取的蛋白质-多酚复合物的组成进行分析，检测其抗氧化活性，并分析其组成对抗氧化活性的影响，以期为烟叶蛋白质的应用提供参考。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料、试剂与仪器
　　低次烤烟叶粉末（2013年河南襄县产豫烟10号X3L等级烟叶）。浓盐酸、Tris、无水乙醇、磷酸、DPPH、邻二氮菲、PBS磷酸盐、硫酸亚铁、H2O2（30%）以上试剂均为分析纯；甲醇、乙酸为色谱级；绿原酸、芸香苷、莨菪葶为标准品（Sigma公司）；中性蛋白酶（200 000 U/g）、碱性蛋白酶（200 000 U/g）（江苏锐阳生物科技有限公司）；考马斯亮蓝G-250、牛血清白蛋白（西安国安生物科技有限公司）；回流装置、水浴锅、低速离心机（湘仪TDZ5-WS型）、紫外分光光度计（UV1700PC型）、Agilent 1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司）、色谱柱为Waters Symme-try C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

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